JP010545S
BeyoGel? Blue Native PAGE預制膠(4-13%, 10孔)
10塊
BeyoGel Blue Native PAGE預制膠(BeyoGel? Blue Native Precast PAGE Gel)是一種使用安全、便捷、高品質(zhì)的常規(guī)尺寸聚丙烯酰胺預制凝膠，主要用于分離細胞膜、胞漿等生物樣品中10kDa-10,000kDa的生物膜蛋白及蛋白質(zhì)復合物。Blue Native PAGE是以考馬斯亮藍G-250代替SDS使蛋白質(zhì)復合物帶上負電荷，并根據(jù)各個不同復合物的分子量差異從而在膠中得到分離，同時這些復合物在膠中以藍色條帶形式呈現(xiàn)。另外，在樣品制備過程中使用一些溫和的非離子型去垢劑進行溶解，從而使復合物以近似天然的狀態(tài)分離。本預制膠有1.5厘米高的濃縮膠，具有非常優(yōu)良的分離效果，電泳后蛋白條帶平整、清晰、細膩、銳利，幾乎沒有邊緣效應；同時本預制膠膠板為玻璃材質(zhì)，減少了對蛋白的非特異性吸附，電泳效果非常好，達到甚至超過了自配Blue Native PAGE膠的電泳效果。
BeyoGel Blue Native PAGE預制膠有10孔和15孔兩種孔數(shù)可供選擇。本預制膠為梯度膠，濃度為4-13%。如果有較大量的特殊濃度需求，可提供定制服務。本產(chǎn)品的最佳分離范圍請參考下表：
產(chǎn)品編號
預制膠濃度
孔數(shù)
最大上樣量
電泳緩沖液體系
最佳分離范圍
JP010545/JP010546
4-13%
10/15
60/30μl
Tricine-Imidazole
60kDa-700kDa
本預制膠含有1.5厘米高的4%濃縮膠，可以有效確保獲得非常銳利的條帶。
本預制膠丙烯酰胺(Acrylamide)與甲叉丙烯酰胺(Bisacrylamide)的比例為29:1，凝膠厚度為1.5mm。加樣孔數(shù)為10孔的最大上樣量為60μl，加樣孔數(shù)為15孔的最大上樣量為30μl。膠板尺寸：寬×高×厚度為98×84×4.1mm；凝膠尺寸：寬×高×厚度為81×74×1.5mm。
聚丙烯酰胺凝膠電泳(Polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE)技術(shù)廣泛用于蛋白質(zhì)、核酸及蛋白質(zhì)-核酸復合物的分離純化、檢測、鑒定、分子量分析等實驗，是生命科學研究中最基本的實驗技術(shù)之一。常見的Western印跡(Western blot)檢測就是基于PAGE的。
Blue Native PAGE (簡稱BN-PAGE)是Hermann Sch?gger等人于1991年建立的蛋白電泳技術(shù)，該電泳技術(shù)的用途有：從生物膜、細胞以及組織勻漿中分離微克量的膜蛋白復合物；線粒體病的臨床診斷；確定蛋白質(zhì)分子量和低聚物狀態(tài)；通過基于抗體的凝膠位移法(Gel-shift method)測定多蛋白復合物的化學計量比(Stoichiometry)；分析蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用；用于2D結(jié)晶(2D-Crystallization)和電子顯微鏡檢測；凝膠內(nèi)活性檢測(In-gel activity assay)；非變性電印跡和免疫檢測；用于神經(jīng)遞質(zhì)組裝、蛋白質(zhì)輸入和凋亡的研究；分離超分子蛋白復合體等[1]。
在Blue Native PAGE中，生物膜樣品使用一些溫和的非離子去垢劑溶解，從而使復合物以近似天然的狀態(tài)分離。特定的非離子去垢劑的選擇取決于相關(guān)蛋白質(zhì)復合物對去垢劑的穩(wěn)定性，常用的去垢劑有洋地黃皂苷(Digitonin) (JP10272) [2]、十二烷基麥芽糖苷(Dodecylmaltoside, DDM)、Triton X-100 (JP7095) [3]等。生物膜溶解和離心后，將陰離子染料考馬斯亮藍G-250加入到上清液中。G-250易溶于水，但由于其疏水性，也可以與蛋白質(zhì)復合物相結(jié)合。BN-PAGE以考馬斯亮藍G-250代替SDS使蛋白質(zhì)復合物帶負電荷，由于帶負電的蛋白相互排斥，蛋白質(zhì)復合物聚集的可能性也大大降低。此外，與染料結(jié)合后蛋白質(zhì)復合物失去疏水性，轉(zhuǎn)化為水溶性。這意味著一旦G-250占據(jù)蛋白表面，BN凝膠中就無需添加SDS等去垢劑，因此，BN-PAGE中，對去垢劑敏感的蛋白變性的風險大大降低。最終，蛋白質(zhì)復合物根據(jù)分子量的不同從而在膠中得到分離，在膠中以藍色條帶等形式呈現(xiàn)。若需要進一步分析復合物各個亞基的成分，還可以采用BN-PAGE結(jié)合SDS-PAGE的方式[1]。
的BeyoGel? Blue Native PAGE預制膠(4-13%)使用中性的咪唑(Imidazole)緩沖液制備，不含SDS。
推薦使用專門為本預制膠研制的配套電泳液，BeyoGel? Blue Native PAGE陰極電泳緩沖液I (JP010765)、BeyoGel? Blue Native PAGE陰極電泳緩沖液II (JP010767)和BeyoGel? Blue Native PAGE陽極電泳緩沖液(JP010769)，或參考使用說明自行配制相應的電泳液。
關(guān)于10孔和15孔預制膠的選擇：需要檢測的樣品數(shù)量多或者需要定量時，推薦使用15孔預制膠，通量更大、更便于進行較多樣品的定量統(tǒng)計分析；需要獲得非常漂亮的代表性圖片時，推薦使用10孔預制膠，10孔預制膠獲得的條帶更加平整和銳利。
本產(chǎn)品使用安全、便捷。本預制膠無需配制，即開即用，去掉梳子即可上樣，而傳統(tǒng)的BN-PAGE配制凝膠繁瑣費時，并且制膠時還會接觸有毒和刺激性試劑。
本產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。本預制膠采用高品質(zhì)玻璃膠板，和塑料膠板相比，大大減少了膠板對蛋白的吸附，電泳效果更好。本產(chǎn)品流水線灌注，品質(zhì)穩(wěn)定可靠，重復性好，不同批次的產(chǎn)品一致性高。
本產(chǎn)品電泳效果好。本預制膠的蛋白質(zhì)分離效果極佳，蛋白條帶平整、清晰、細膩、銳利，轉(zhuǎn)膜效率高。
本產(chǎn)品電泳槽兼容性好。本預制膠兼容市場上主流的小型電泳槽，如的MiniProGel?蛋白制膠與電泳系統(tǒng)(E6001/E6005)、Bio-Rad公司的Mini-PROTEAN? Tetra Cell電泳槽、Life公司的XCell SureLock? Mini-Cell電泳槽(需與可免費提供的特制擋板配合使用)、以及上海天能、北京六一等的mini膠電泳槽或其它膠板寬度在10厘米的電泳槽。
本產(chǎn)品取出凝膠極為便捷。只需用刀片在玻璃膠板一側(cè)輕輕劃一下即可，并且玻璃膠板打開極為方便，無需特殊的起撬工具。
JP010545S
BeyoGel? Blue Native PAGE預制膠(4-13%, 10孔)
10塊
保存條件：
4℃保存，2個月有效。切勿置于0℃以下冷凍。
注意事項：
由于本預制膠保質(zhì)期較短，需新鮮制備，在您確認訂購后約3-5個工作日才能發(fā)貨。
雖然4-13%的本梯度預制膠可覆蓋的蛋白質(zhì)分子量范圍為10kDa-10,000kDa，但小于100kDa或大于700kDa的蛋白質(zhì)可能不能很好地被分離[1]。如果需要檢測這兩類蛋白，需要進行一定的條件摸索，特別是對于60kDa以下的蛋白，應根據(jù)情況及時停止電泳，避免小分子量蛋白跑出凝膠。
本預制膠不能置于0℃以下冷凍，否則凝膠會凍裂。
樣品處理為BN-PAGE的關(guān)鍵，去污劑的濃度以及去污劑和蛋白的比例非常重要，需進行預實驗摸索適合的條件。
樣品上樣量不宜過大，樣品過多會導致樣品沉積于上樣孔中不能電泳至凝膠中，上樣量需根據(jù)上樣孔的大小以及膠的厚度決定。每個孔上樣的樣品體積不宜超過上樣孔容積的4/5，所以必須控制樣品的濃度，濃度太低需濃縮。一般10孔預制膠的上樣量需小于48μl，15孔預制膠的上樣量需小于24μl。
樣品的鹽離子濃度需要非常低，否則會導致樣品在上樣孔沉積。如鹽離子濃度很高，首先須脫鹽。
與樣品有關(guān)的所有操作必須在冰上進行，以保證蛋白復合物的完整性。
內(nèi)槽電泳液和轉(zhuǎn)膜液建議新鮮配制，試劑純度不夠、反復使用或長期放置的緩沖液會降低電泳效果。
本預制膠為了兼容幾乎所有廠家的小型凝膠電泳槽，所以改進了與電泳槽U型硅橡膠密封條的吻合結(jié)構(gòu)(如、Bio-Rad等公司的電泳槽)。建議在電泳時須將具有突起結(jié)構(gòu)的U型硅橡膠密封條取出后反過來安裝，使其沒有突起的平滑面朝外，從而防止漏液，見下圖。一般內(nèi)槽電泳液加滿，外槽電泳液沒過電泳槽底部的陽極即可，并且電泳結(jié)束后的電泳緩沖液可以作為外槽緩沖液重復使用1-2次。另外，部分公司都已經(jīng)配套無突起結(jié)構(gòu)的U型硅橡膠密封條，使用這樣的U型硅橡膠密封條就不會出現(xiàn)內(nèi)外槽之間的漏液現(xiàn)象。
圖1. 、Bio-Rad等公司的電泳槽U型硅橡膠密封條的突起結(jié)構(gòu)圖。由于的BeyoGel? PAGE預制膠的該部位是平的，使其兼容幾乎所有廠家的小型膠電泳槽，所以電泳時須將具有突起結(jié)構(gòu)的硅橡膠密封條(左圖)取出后反過來安裝(右圖)，使其沒有突起的平滑面朝外，從而防止漏液。
由于的BeyoGel PAGE預制膠比Life公司的XCell SureLock Mini-Cell電泳槽配套的NuPAGE Gel或Novex Mini Gel略薄，所以需加特制擋板配合使用。如有需要，請在訂購本產(chǎn)品時告知，會免費贈送該特制擋板。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
Benzamidine Sepharose 4 Fast Flow.pdf
