無(wú)DMSO的皮膚及神經(jīng)組織用冷藏保存液
ThelioKeep?
ThelioKeep是一種不含DMSO和血清蛋白，適用于上皮、內(nèi)皮組織以及神經(jīng)組織的冷藏保存液。
※ 本產(chǎn)品僅供研究使用。研究以外不可使用。
◆特點(diǎn)?優(yōu)勢(shì)
● 維持物理性質(zhì)上較為脆弱的組織膜形態(tài)，保持增殖功能的同時(shí)可冷藏（4~10°C）保存1~2周。
● 在綠茶茶多酚（表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯：EGCG）的保護(hù)作用下，可保存薄且脆弱的組織。
● 除上皮、內(nèi)皮組織之外，也可用于神經(jīng)組織使用。末梢神經(jīng)可維持電生理功能。
● 適用于包含人、小鼠、大鼠在內(nèi)的大多數(shù)哺乳動(dòng)物組織。
● 保存后的組織經(jīng)過(guò)清洗，可用于使用了適當(dāng)培養(yǎng)基的各種實(shí)驗(yàn)。
● 不含血清以及蛋白成分，DMSO、甘油等防腐劑。
● 已通過(guò)無(wú)菌測(cè)試確認(rèn)本產(chǎn)品不含細(xì)菌、真菌、支原體。
● 本產(chǎn)品由液體、固體防腐劑各一支組成套裝，未開(kāi)封（制備前）的狀態(tài)下可在4°C下保存約1年。
● 成分：無(wú)機(jī)離子，D-葡萄糖，氨基酸，pH調(diào)節(jié)劑（液體防腐劑），表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（EGCG），
● 酚紅（固體防腐劑）
◆應(yīng)用實(shí)例1
比較人角膜內(nèi)皮組織的形態(tài)以及增殖速度
用本產(chǎn)品（右）和其他公司產(chǎn)品（左）保存人角膜內(nèi)皮組織2周（4°C）后比較其形態(tài)（左圖）。使用本產(chǎn)品保存的組織可維持六角形的細(xì)胞膜形態(tài)。相反，使用其他公司產(chǎn)品保存的組織的細(xì)胞膜形態(tài)已完全消失。另外，已確認(rèn)使用本產(chǎn)品保存的組織以約2倍的速度增殖（右圖）。
比較神經(jīng)組織的形態(tài)以及電導(dǎo)率
用本產(chǎn)品（右）或其他公司產(chǎn)品（左）保存大鼠末梢神經(jīng)組織2周（4°C）后，移植到另一只大鼠，再經(jīng)過(guò)24周后取出，使用透射電子顯微鏡觀察形態(tài)（左圖）與運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度（MCV：右圖）。新鮮組織表示未經(jīng)保存的神經(jīng)移植后的數(shù)值。
假設(shè)移植前神經(jīng)的MCV值為100%?？纱_認(rèn)使用本產(chǎn)品保存的組織在移植24周后仍然保持形態(tài)不萎縮并保持完好的功能。
圖像中柱狀長(zhǎng)度為20 μm。
參考文獻(xiàn)
Ikeguchi, R., et al., Experimental Neurology, 184, 688～696 (2003).
Ikeguchi, R., et al., Transplantation, 79, 688～695 (2005).
◆應(yīng)用實(shí)例2
使用本產(chǎn)品保存的人培養(yǎng)骨膜片進(jìn)行二次培養(yǎng)時(shí)的增殖情況
將培養(yǎng)了21天的人培養(yǎng)骨膜片在4°C下保存2天后，再次進(jìn)行培養(yǎng)。
川瀨老師（右）與研究室的成員
數(shù)據(jù)提供：新瀉大學(xué)牙科系 牙科基礎(chǔ)移植、再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域 川瀨知之老師
參考文獻(xiàn)：Kamiya, M., et al., Biopreservation and Biobanking, 10 (3), 245～252 (2012)
◆應(yīng)用實(shí)例3
人來(lái)源培養(yǎng)口腔黏膜上皮細(xì)胞片保存前后的評(píng)估
（1）培養(yǎng)上皮細(xì)胞片的回收試驗(yàn)（2）總細(xì)胞數(shù)
（3）培養(yǎng)上皮細(xì)胞切片中的細(xì)胞活率
（4）HE染色圖
保存前
保存后
保存后
● 細(xì)胞：人來(lái)源培養(yǎng)口腔黏膜細(xì)胞片
● 培養(yǎng)皿： 35 mm UpCell（R）（CellSeed株式會(huì)社）
● 培養(yǎng)條件：37°C ，5％CO2， 14天
● 保存條件：4°C，7天
將人來(lái)源口腔粘膜上皮細(xì)胞放在35 mm UpCell（R）中與NIH-3T3共培養(yǎng)14天，制備培養(yǎng)上皮細(xì)胞片。
然后，將培養(yǎng)上皮細(xì)胞片浸于各種保存液（PBS、ThelioKeep（R））中，在4°C下靜置7天。
保存后的第7天，進(jìn)行（1）回收細(xì)胞片；（2）總細(xì)胞數(shù)；（3）細(xì)胞活率檢測(cè)（使用流式細(xì)胞儀分析7-AAD染色）以及（4）HE染色，比較保存前后的狀態(tài)。
香取老師（第一列右）、林老師（中間）與研究室的成員
數(shù)據(jù)提供：大阪大學(xué) 研究生院 醫(yī)學(xué)研究科 腦神經(jīng)感應(yīng)外科 眼科 香取良祐老師、林龍平老師
◆操作方法概要
1. 在無(wú)菌條件下向附帶的含有防腐劑（EGCG）的微管中加入約0.5 mL本產(chǎn)品并溶解，溶解后將所有溶液倒回
1. ThelioKeep的瓶中并攪拌。
2. 確認(rèn)防腐劑完全溶解后，向離心管等容器加入數(shù)mL溶液，在4~10°C下冷卻。
3. 將從實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中切除的上皮、內(nèi)皮組織浸沒(méi)于上一步的溶液中，蓋好蓋子在4°C下保存。
4. 使用預(yù)冷PBS輕輕清洗上一步保存的組織后，轉(zhuǎn)移至實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基中，在組織存活狀態(tài)下用于實(shí)驗(yàn)。
※ 所制備溶液請(qǐng)盡快使用。分裝時(shí)可在-20°C下保存1~2周。
※ 培養(yǎng)時(shí)，請(qǐng)?zhí)崆皩⒈４嬉夯謴?fù)到正常生理活性溫度（如37°C）。
※ 在制備切片等組織標(biāo)本時(shí)，請(qǐng)快速將其固定。
※ 提取組織內(nèi)的物質(zhì)時(shí)，請(qǐng)?zhí)崆霸陬A(yù)冷的PBS中仔細(xì)清洗。
