IP/Co-IP細(xì)胞裂解液-500ml品牌:JinPan | 貨號(hào):JP-8142-500ml
IP/Co-IP Cell Lysis Buffer
【保存條件】
4oC 保存
【操作方法】
裂解貼壁細(xì)胞的方法(裂解前可加入相應(yīng)蛋白酶/磷酸酶抑制劑):
1. 小心地從細(xì)胞中去除培養(yǎng)基。 用冰冷的 PBS 清洗一次。
2. 將冰冷 IP 細(xì)胞裂解緩沖液添加到細(xì)胞板中(6 孔板中每孔加入 200-400μl),并在冰上孵 育 5 分鐘,中途不間斷混勻。
3. 將裂解液轉(zhuǎn)移至微量離心管中,以約 13,000×g 的速度離心 10 分鐘,以在 4°C 下沉淀細(xì) 胞碎片。
4. 將上清液轉(zhuǎn)移到新的試管中,以測(cè)定蛋白濃度并進(jìn)行進(jìn)一步分析。
裂解懸浮細(xì)胞的方法(裂解前可加入相應(yīng)蛋白酶/磷酸酶抑制劑):
1. 將細(xì)胞懸液以 1,000×g 離心 5 分鐘以沉淀細(xì)胞,丟棄上清液。
2. 用冰冷的 PBS 洗滌細(xì)胞一次,以 1,000×g 離心 5 分鐘以沉淀細(xì)胞。
3. 將冰冷的 IP 細(xì)胞裂解緩沖液添加到細(xì)胞沉淀中。每 50 mg 濕細(xì)胞沉淀(10:1 v / w)使 用 500μl 裂解緩沖液。
4. 在冰上孵育裂解物 5 分鐘。通過(guò)在 4°C 下以?13,000×g 離心 10 分鐘去除細(xì)胞碎片。
5. 將上清液轉(zhuǎn)移到新的試管中,以測(cè)定蛋白濃度并進(jìn)行進(jìn)一步分析。
【注意事項(xiàng)】
1. 為了您的安全與健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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