產(chǎn)品編號(hào)
JP07045S
HA&Myc Co-IP陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒對(duì)
各1μg
1776
JP07045M
HA&Myc Co-IP陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒對(duì)
各100μg
2338
自行研發(fā)生產(chǎn)的HA&Myc Co-IP陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒對(duì)(Positive Control Plasmids Pair for HA&Myc Co-IP)包含pCMV-HA-JP5和pCMV-Myc-LTA兩種質(zhì)粒，可以用于在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)N端帶有HA標(biāo)簽的人源JP5和Myc標(biāo)簽的LTA (large T antigen)融合蛋白。因?yàn)镴P5和LTA蛋白間具有較強(qiáng)的相互作用，本質(zhì)粒對(duì)可作為共轉(zhuǎn)染細(xì)胞免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)的陽(yáng)性對(duì)照使用，也可以單獨(dú)轉(zhuǎn)染細(xì)胞作為免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)的陽(yáng)性對(duì)照使用。
免疫沉淀或免疫共沉淀是研究蛋白或蛋白與蛋白相互作用(Protein-Protein Interactions, PPIs)的常用實(shí)驗(yàn)技術(shù)，通過(guò)使用特異性抗體和可結(jié)合抗體的介質(zhì)(如Protein A/G Agarose或Protein A/G磁珠)，或直接使用偶聯(lián)特異性抗體的介質(zhì)(如瓊脂糖凝膠或磁珠)，然后通過(guò)離心或磁力從溶液中分離出抗原和抗體復(fù)合物，從而將目標(biāo)蛋白質(zhì)從復(fù)雜樣品中分離出來(lái)，隨后可以用于Western印跡檢測(cè)或質(zhì)譜分析等[1-2]。
pCMV-HA-JP5質(zhì)粒表達(dá)JP5。JP5中文名為細(xì)胞腫瘤抗原JP5 (Cellular tumor antigen JP5)，全長(zhǎng)393氨基酸，理論分子量為43.7kDa，實(shí)際分子量約為53kDa，是調(diào)控細(xì)胞周期的重要轉(zhuǎn)錄因子，主要功能包括調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、促進(jìn)細(xì)胞凋亡、維持基因組穩(wěn)定性和抑制腫瘤血管生成等，野生型的JP5是一個(gè)重要的抑癌基因[3]。
pCMV-Myc-LTA質(zhì)粒表達(dá)LTA。LTA即SV40大T抗原(SV40 large T antigen)，也稱SV40gp6 large T antigen (Macaca mulatta polyomavirus 1)，全長(zhǎng)708氨基酸，分子量為81.6kDa，是一種六聚體蛋白。當(dāng)LTA單獨(dú)表達(dá)時(shí)能誘導(dǎo)靜止細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)化，可以誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腫瘤的形成，為研究DNA復(fù)制和細(xì)胞轉(zhuǎn)化提供了非常有用的模型[4]。
本質(zhì)粒對(duì)均含有CMV啟動(dòng)子，可以高效啟動(dòng)目的蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)，均帶有氨芐青霉素(Ampicillin)抗性和新霉素(Neomycin)抗性。
本質(zhì)粒對(duì)用于磁珠法免疫共沉淀的效果參考圖1A，用于瓊脂糖凝膠法免疫共沉淀的效果參考圖1B。
圖1. 的HA&Myc Co-IP陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒對(duì)(JP07045)用于免疫共沉淀的效果圖。圖A使用了HA標(biāo)簽蛋白免疫沉淀試劑盒(磁珠法) (JP2085)和Myc標(biāo)簽蛋白免疫沉淀試劑盒(磁珠法) (JP2083)，圖B使用了HA標(biāo)簽蛋白免疫沉淀試劑盒(瓊脂糖凝膠法) (JP2006)和Myc標(biāo)簽蛋白免疫沉淀試劑盒(瓊脂糖凝膠法) (JP2004)。293T細(xì)胞(人胚腎細(xì)胞)單獨(dú)或共轉(zhuǎn)染pCMV-HA-JP5和pCMV-Myc-LTA質(zhì)粒36小時(shí)后，使用Western及IP細(xì)胞裂解液(JP010013)裂解。泳道1為小鼠IgG磁珠或瓊脂糖凝膠免疫沉淀后洗脫的樣品，為免疫共沉淀的陰性對(duì)照；泳道2、3和4為磁珠或瓊脂糖凝膠免疫沉淀后洗脫的樣品，其中圖A是經(jīng)HA Peptide或c-Myc Peptide洗脫后的樣品，圖B是經(jīng)SDS-PAGE Sample Loading Buffer洗脫后的樣品，從泳道4可觀察到共轉(zhuǎn)染的HA-JP5與Myc-LTA可以相互作用。Input即全細(xì)胞裂解液(Total cell lysate)。Western印跡成像由BeyoImager? 600化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)完成(EI600)。實(shí)際結(jié)果會(huì)因?qū)嶒?yàn)條件、檢測(cè)儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。
推薦使用的測(cè)序引物序列如下：
CMV-F primer: 5′ -CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3′
BGH-R primer: 5′-TAGAAGGCACAGTCGAGG-3′
pCMV-HA-JP5和pCMV-Myc-LTA的全序列信息:JP07045-1 pCMV-HA-JP5-全序列.txt；JP07045-2 pCMV-Myc-LTA-全序列.txt。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
JP07045S-1
pCMV-HA-JP5
1μg
JP07045S-2
pCMV-Myc-LTA
1μg
—
說(shuō)明書(shū)
1份
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
JP07045M-1
pCMV-HA-JP5
100μg
JP07045M-2
pCMV-Myc-LTA
100μg
—
說(shuō)明書(shū)
1份
保存條件：
-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
本質(zhì)粒未經(jīng)書(shū)面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實(shí)驗(yàn)室外的任何個(gè)人或單位。
本質(zhì)粒對(duì)僅經(jīng)過(guò)測(cè)序、免疫沉淀和免疫共沉淀驗(yàn)證，未經(jīng)過(guò)功能性驗(yàn)證。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。