粘蛋白檢測試劑盒
Mucin Assay Kit
- 產(chǎn)品特性
- 相關(guān)資料
- Q&A
- 參考文獻(xiàn)
粘蛋白檢測試劑盒
Mucin Assay Kit
——健康和美容研究試劑
◆背景
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粘蛋白屬于高度糖基化蛋白質(zhì)家族，是粘膜的主要成分，例如唾液，淚液，胃液，腸液。粘蛋白的 基本構(gòu)型是枝狀糖鏈連接到多肽的大分子。糖鏈的非均質(zhì)特性使其具有多樣性，分子具有各種功能，如特異性分子識別。 糞便粘蛋白測定可用作腸屏障功能的指標(biāo)。該試劑盒利用熒光檢測來測定粘蛋白的含量。 我們提供的該試劑盒可以供研究功能性食物和感染的客戶使用。 |
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步驟１：從糞便中提取和部分純化粘蛋白。
步驟２：粘蛋白Ｏ-糖苷連接的寡糖鏈的測定通過稀堿進(jìn)行β-消除，形成糖鏈的還原端。還原碳水化合物在高溫下進(jìn)行熒光標(biāo)記以產(chǎn)生熒光縮合
物。
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粘蛋白的結(jié)構(gòu)
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◆試劑盒組分
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組件 |
規(guī)格 |
數(shù)量 |
儲存條件 |
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緩沖溶液Ａ |
100 mL |
3 |
4-10℃ |
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緩沖溶液Ｂ |
25 mL |
1 |
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緩沖溶液Ｃ |
25 mL |
1 |
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試劑Ａ |
1.0 mL |
1 |
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|
試劑Ｂ |
1.5 mL |
2 |
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標(biāo)準(zhǔn)溶液 （GalNA，250 μg/mL） |
1.0 mL |
1 |
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酶溶液 |
1.5 mL |
1 |
◆優(yōu)點(diǎn)?特色
● 粘蛋白和 IgA 能阻止細(xì)菌和毒素的入侵
● 作為腸屏障的一部分，粘蛋白和 IgA 能防止病原菌和毒素通過腸壁轉(zhuǎn)移到血管內(nèi)。
測定理論
通過對糞便中的 β-葡萄糖苷酶熱變性防止糞便粘蛋白降解
↓
粗提取粘蛋白
↓
用酶溶液分解淀粉
↓
用乙醇沉淀純化粘蛋白
↓
將試劑Ａ加入純化的粘蛋白中，并在堿性條件下進(jìn)行熱處理。 （試劑Ａ將與粘蛋白的糖還原末端反應(yīng)，并在堿處理后發(fā)出熒光）
↓
加入緩沖液Ｃ并測定熒光強(qiáng)度（激發(fā)336nm，熒光383nm）
?。ň唧w操作請看相關(guān)資料）
◆案例?應(yīng)用
喂食高脂肪食物的大鼠腸屏障部分注射多酚的效果
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圖1 粘蛋白定量標(biāo)準(zhǔn)曲線 |
圖2 糞便中的粘蛋白含量 |
應(yīng)用
用于測定糞便中的粘蛋白含量。
相關(guān)資料
Mucin_Assay_Kit.
◆操作步驟
● 本產(chǎn)品是專為熒光酶標(biāo)儀測量設(shè)計(jì)（96孔板）。
● 當(dāng)使用熒光讀板機(jī)時(shí)，可測量100個(gè)樣品。
● 當(dāng)使用分光光度計(jì)測量時(shí)，請使用微細(xì)胞。
緩沖液Ａ的制備 II.糞便粘蛋白的測定
用100 mL蒸餾水溶解1塊片劑。
糞便粉末的制備：糞便凍干并在研缽中研磨，儲存在-20℃?zhèn)溆谩?/p>
1、稱量100 mg糞便粉末放入微量試管（2 mL）中，加入1 mL緩沖液A，然后用渦流混合器混合30秒鐘。
2、在95℃下加熱試管10分鐘使細(xì)菌的糖苷酶變性。
3、在37℃下加熱90分鐘，從糞便中提取粘蛋白。
4、在4℃下離心20,000×g 15分鐘。
5、將200 μL上清液轉(zhuǎn)移到另一個(gè)微量試管中，加入200 μL緩沖液B，用渦流混合器混合溶液。
6、加入10 μL酶溶液混合，在50℃下加熱試管20分鐘分解淀粉。
7、將離心管冷卻至室溫，加入125 μL的99.5％乙醇，混合后，在-20℃下靜置過夜。
8、次日，在4℃下20,000×g離心10分鐘，去上清。向沉淀加入1mL緩沖液A，重溶沉淀。（樣品溶液）
9、將20 μL樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液轉(zhuǎn)移到另一個(gè)微量試管（500 μL）中，加入24 μL試劑混合物（使用前以1:5混合試劑A和試劑B），混合后， 100℃下加熱微量試管30分鐘。
10、冷卻至室溫，加入200 μL緩沖液C，用渦流混合器混合。
11、將100 μL溶液轉(zhuǎn)移到96孔黑色孔板中，并在波長（例如：336 nm em：383 nm）實(shí)用熒光讀板機(jī)測量熒光強(qiáng)度。
12、通過如下所示的連續(xù)稀釋創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。 通過這些點(diǎn)繪制平滑曲線以構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。 通過標(biāo)準(zhǔn)曲線讀取樣品的濃度。
13、計(jì)算1 g糞便中的粘蛋白含量。步驟（12）測得的值的50倍是1g糞中的粘蛋白含量。
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Calibrator Number |
Quantaity of Standard |
Quantaity of Dilution Buffer |
Final Concentration |
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1 |
500 μL of Standard Solution |
0 |
250 μg/mL |
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2 |
500 μL of Calibrator 1 |
500 μL |
125 μg/mL |
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3 |
500 μL of Calibrator 2 |
500 μL |
63 μg/mL |
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4 |
500 μL of Calibrator 3 |
500 μL |
31.5 μg/mL |
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5 |
500 μL of Calibrator 4 |
500 μL |
15.75 μg/mL |
|
6 |
500 μL of Calibrator 5 |
500 μL |
7.875 μg/mL |
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7 |
0 |
500 μL |
0 |
工作校準(zhǔn)品：N-乙酰葡萄糖胺250 μg/ mL
● 通過連續(xù)稀釋創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線，如下圖所示。
● 剩余的未稀釋校準(zhǔn)品應(yīng)儲存在2-10°C。
● 稀釋校準(zhǔn)品穩(wěn)定，可在2-10°C保存1個(gè)月。
參考文獻(xiàn)
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| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級 | 備注 |
| CSR-FFA-Mu-K01E | Mucin?Assay?Kit 粘蛋白檢測試劑盒 |
1盒 |
| 免責(zé)聲明 |
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