產(chǎn)品編號

JP070201S
微球菌核酸酶(Micrococcal Nuclease, MNase)
320KU

398

JP070201M
微球菌核酸酶(Micrococcal Nuclease, MNase)
1600KU

1296

生產(chǎn)的微球菌核酸酶(Micrococcal Nuclease, MNase)，也被稱為Micrococcal Endonuclease或S7 Nuclease，是一種來源于金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的核酸內(nèi)切酶，CAS號為9013-53-0，分子量約18.6kDa，在pH7.0-10.0和Ca2+的條件下可降解單鏈、雙鏈、線狀、環(huán)狀等多種形式的DNA或RNA，并產(chǎn)生3’磷酸末端的單核苷酸和寡核苷酸。MNase對單鏈核酸的切割效率比雙鏈核酸更高。MNase在腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)或尿嘧啶(U)的5’側(cè)的切割效率是鳥嘌呤(G)或胞嘧啶(C)的約30倍，能較好地酶解富含AT或AU區(qū)域，所以MNase是“相對”非特異性的核酸內(nèi)切酶，常用于去除細(xì)胞裂解液中的核酸等[1]。另外，MNase僅酶解核小體連接區(qū)的DNA，而核小體上的DNA被組蛋白保護(hù)而不被MNase酶解，因此MNase也常被應(yīng)用于染色質(zhì)免疫沉淀實驗中的染色質(zhì)片段化。
染色質(zhì)免疫沉淀(Chromatin immunoprecipitation assay, ChIP)的原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下交聯(lián)或不交聯(lián)蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物，通過超聲或MNase酶處理將染色質(zhì)(Chromatin)隨機切斷為小片段，然后利用特異性抗體，將與目的蛋白與相結(jié)合的DNA片段免疫沉淀，通過多種下游檢測技術(shù)(定量PCR、PCR、Southern、基因芯片、高通量測序等)來檢測免疫沉淀的DNA片段的序列。ChIP通常用于檢測轉(zhuǎn)錄因子(Transcription factors)或組蛋白(Histone)等基因組DNA結(jié)合蛋白是否和預(yù)期的特定基因組DNA序列如啟動子(Promoter)、增強子(Enhancer)等在同一復(fù)合物中，對于研究基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控和表觀遺傳至關(guān)重要[2-3]。
染色質(zhì)免疫沉淀根據(jù)對染色質(zhì)的處理方式不同，分為交聯(lián)染色質(zhì)免疫沉淀(Cross-linked ChIP, X-ChIP)和非交聯(lián)染色質(zhì)免疫沉淀(Native ChIP, N-ChIP)。交聯(lián)染色質(zhì)免疫沉淀：甲醛等交聯(lián)染色質(zhì)后使用超聲波破碎或者M(jìn)Nase酶處理獲得200-1000bp的DNA片段，適合研究與DNA或組蛋白親和力較弱的蛋白質(zhì)，交聯(lián)可以使它們保持在適當(dāng)?shù)奈恢貌⒈苊獾鞍踪|(zhì)從相應(yīng)的DNA結(jié)合位點解離；非交聯(lián)染色質(zhì)免疫沉淀：不需要交聯(lián)，未經(jīng)處理的染色質(zhì)通常使用MNase酶處理將染色質(zhì)酶解為含有1-5個核小體(Nucleosome, ～200bp/個)的片段，適合研究特定組蛋白修飾的DNA結(jié)合位點。兩種染色質(zhì)免疫沉淀的優(yōu)缺點總結(jié)如下表，可根據(jù)實驗?zāi)康倪M(jìn)行選擇 [4]。

交聯(lián)染色質(zhì)免疫沉淀(Cross-linked ChIP, X-ChIP)
非交聯(lián)染色質(zhì)免疫沉淀(Native ChIP, N-ChIP)

優(yōu)點
研究與DNA或組蛋白親和力較弱或間接結(jié)合的蛋白質(zhì)；適合天然染色質(zhì)難以制備的生物體(例如：酵母菌)；交聯(lián)可使核小體重排降至最低；實驗需要的細(xì)胞材料更少。
由于目標(biāo)蛋白仍可保持天然構(gòu)像，抗體特異性好；由于抗體特異性好，染色質(zhì)和蛋白質(zhì)回收效率較高，通常能產(chǎn)生足夠的蛋白質(zhì)用于分析。

缺點
超聲處理可能使蛋白質(zhì)變性、降解、抗原表位破壞，從而導(dǎo)致抗體無法結(jié)合或無法高效結(jié)合；如果蛋白被瞬時固定在染色質(zhì)上，可能造成假陽性；超聲處理法制備染色質(zhì)剪切大小范圍廣導(dǎo)致分辨率低。
對非組蛋白效果通常較差；因未交聯(lián)固定，MNase酶解過程中核小體可能發(fā)生重排。

本產(chǎn)品采用自主研發(fā)的PerfectProtein?技術(shù)平臺表達(dá)、純化，表達(dá)純化獲得的重組蛋白，純度高于98% (SDS-PAGE)，與天然Staphylococcus aureus的MNase氨基酸序列完全一致，沒有額外的標(biāo)簽，沒有額外的氨基酸，與天然微球菌核酸酶相比在生化特性方面相同。如下圖所示，本產(chǎn)品與國外同類產(chǎn)品Competitor N相比，降解核酸的效果基本一致。

圖1. 的微球菌核酸酶(Micrococcal Nuclease, MNase) (JP070201)降解核酸效果圖。在20μl反應(yīng)體系中(50mM Tris pH8.0, 5mM CaCl2)，加入1μg Lambda DNA及相應(yīng)量的本產(chǎn)品或國外同類產(chǎn)品Competitor N，37℃孵育15分鐘，反應(yīng)完畢后立即置于冰浴，并加入1μl 0.5M EDTA pH8.0以終止反應(yīng)。加入4μl DNA上樣緩沖液(6X) (D0071)，使用BeyoGel?瓊脂糖預(yù)制膠(D0161)進(jìn)行電泳檢測。實驗結(jié)果顯示本產(chǎn)品與國外同類產(chǎn)品Competitor N的酶活性基本一致。實際效果會因樣品種類、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。
MNase用于染色質(zhì)免疫沉淀實驗具有完整性好、溫和等優(yōu)越性。MNase在核小體間DNA linker上進(jìn)行切割保持了核小體的完整性；MNase酶解染色質(zhì)條件更溫和，消除了超聲功率的可變性和超聲過程中染色質(zhì)乳化所帶來的負(fù)面影響；避免了因超聲導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性和降解使抗原表位的破壞，保證了抗體的有效結(jié)合。
活性定義：One Agarose Gel Unit is defined as the amount of enzyme required to digest 1μg of Lambda DNA in 15 minutes at 37℃, to the extent that the accumulation of low molecular DNA fragments is <400 base pairs as determined by agarose gel electrophoresis. Another Unit is Kunitz Unit. One Kunitz Unit is defined as the amount of enzyme required to release acid soluble oligonucleotides that produce an absorbance increase of O.D. 1.0 at 260nm in 30 minutes at 37℃. 1000 Agarose Gel Units is approximately equal to 100 Kunitz Units. 酶儲存溶液：5mM Tris (pH7.4), 50mM NaCl, 1mM EDTA, 50% Glycerol。本產(chǎn)品中同時提供BSA (100X)用于MNase的稀釋。 Reaction Buffer (10X): 500mM Tris (pH8.0), 50mM CaCl2. 失活或抑制：65℃加熱10分鐘或加入適量EDTA或EGTA可使酶失活。 用于染色質(zhì)免疫沉淀實驗時，如按4×106個細(xì)胞使用0.5-1μl MNase (2000 gel units/μl)，本產(chǎn)品小包裝JP070201S可以進(jìn)行160-320次反應(yīng)，中包裝JP070201M可以進(jìn)行800-1600次反應(yīng)。 包裝清單： 產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 包裝 JP070201S-1 MNase (2000 gel units/μl) 160μl JP070201S-2 Reaction Buffer (10X) 1.6ml JP070201S-3 BSA (100X) 250μl － 說明書 1份 產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 包裝 JP070201M-1 MNase (2000 gel units/μl) 800μl JP070201M-2 Reaction Buffer (10X) 8ml JP070201M-3 BSA (100X) 1.2ml － 說明書 1份 保存條件： -20℃保存，一年有效。 注意事項： 本品含50%甘油，-20℃保存不會凍結(jié)。須避免-80℃保存，凍融可能會降低本產(chǎn)品的酶活性。 本品較為粘稠，吸取時注意取樣量準(zhǔn)確，加樣后請注意充分吹打混勻，避免產(chǎn)生氣泡。 Ca2+是MNase的關(guān)鍵催化輔助因子，反應(yīng)緩沖液含有1-5mM Ca2+對MNase的酶活性是必須的，反應(yīng)溶液中如有EDTA、EGTA等金屬離子螯合劑會影響酶活性。 反應(yīng)溶液中鹽離子濃度須低于100mM，過高的鹽濃度會影響MNase的酶活性。 如果樣品中不含蛋白質(zhì)，則將BSA以1X的終濃度加入反應(yīng)緩沖液中。 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。