產(chǎn)品編號
PA082
Human Amyloid β-Peptide (1-42) ELISA Kit
96次
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生產(chǎn)的Human Amyloid β-Peptide(1-42)ELISA Kit (Human Amyloid β-Peptide(1-42)Enzyme-Linked ImmunoSorbent AssayKit)，即人β-淀粉樣蛋白肽(1-42)酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測人腦脊液中的Amyloid β-Peptide(1-42)的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為109pg/ml，與人Amyloid Protein及大、小鼠Amyloid β-Peptide (1-40)等均沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
淀粉樣β肽(Amyloid β-Peptide, Aβ)是淀粉樣前體蛋白(Amyloid precursor protein, APP)的蛋白水解片段，其形成的原纖維在阿爾茨海默病病理過程中起著不可或缺的作用。阿爾茲海默病患者的一個(gè)主要特征就是大腦中高毒性物質(zhì)的積累，即衰老斑塊或老年斑(Senile plaques, SP)的積累。Aβ原纖維構(gòu)成SP的主要蛋白質(zhì)成分，在缺氧、創(chuàng)傷性腦損傷和慢性炎癥的情況下，SP積聚增加。Aβ也直接對神經(jīng)元產(chǎn)生多重作用。APP是一種多功能跨膜蛋白，由682個(gè)氨基酸胞外結(jié)構(gòu)域(Extracellular domain, ECD)、24個(gè)氨基酸跨膜段和47個(gè)氨基酸胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域組成，其ECD包含兩個(gè)肝素結(jié)合域、一個(gè)銅結(jié)合域、一個(gè)BPTI/Kunitz結(jié)構(gòu)域和一個(gè)膠原結(jié)合域。
APP在多個(gè)位點(diǎn)發(fā)生蛋白水解裂解，可能導(dǎo)致也可能不導(dǎo)致Aβ的產(chǎn)生。在非淀粉樣變性途徑(Non-amyloidogenic pathway)中，經(jīng)Aβ區(qū)域內(nèi)的α-分泌酶(α-secretase)切割，抑制Aβ生成，并釋放可溶性APP-α和C端片段α (C-terminalfragment α, CTF-α) 。CTF-α再經(jīng)過γ-分泌酶(γ-secretase)切割，生成無毒性的P3肽和APP胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域(APP intracellular domain, AICD)，釋放到細(xì)胞質(zhì)的AICD片段被蛋白酶降解。淀粉樣途徑(Amyloidogenic pathway)即病理過程是指APP在質(zhì)膜上被β-分泌酶(β-secretase，又稱β-site amyloid cleavage enzyme,BACE)和γ-分泌酶在N端和C端的順序切割，生成可溶性APPβ和C端片段β (C-terminalfragment β, CTF-β)。CTF-β再經(jīng)過γ-分泌酶切割，生成不同長度的Aβ片段和AICD。被β-分泌酶和γ-分泌酶水解斷裂產(chǎn)生的Aβ為含有38-43個(gè)氨基酸的肽鏈，其中Aβ (1-40)和Aβ (1-42)含量最多。Aβ(1-40)在腦脊液中相對豐富，而Aβ (1-42)更疏水，更容易聚集，與阿爾茨海默病的病理學(xué)關(guān)系更密切，這種肽的異常高水平形成并在阿爾茨海默病患者的大腦中積累，形成該病特有的SP。人Aβ(1-42)與小鼠和大鼠Aβ (1-42)具有約93%的氨基酸同源性。
Aβ肽可在細(xì)胞內(nèi)結(jié)合成二聚體、高階低聚物和不溶性纖維。它們增強(qiáng)了Tau蛋白的過度磷酸化(Hyperphosphorylation)和神經(jīng)原纖維纏結(jié)(Neurofibrillary tangles)的形成。Aβ還與ApoE形成纖維并與朊蛋白PrPC結(jié)合。在各種形式的Aβ中，低聚物在損害認(rèn)知功能、抑制海馬神經(jīng)元長時(shí)程增強(qiáng)(Long term potentiation, LTP)和誘導(dǎo)神經(jīng)元氧化應(yīng)激(Oxidative stress)方面最為有效。相反，單體Aβ可以防止興奮毒性神經(jīng)元細(xì)胞死亡。Aβ可直接破壞神經(jīng)元膜的完整性，其神經(jīng)毒性通過其體內(nèi)糖基化或焦谷氨酰胺基化(Pyroglutamylation)而增加。Aβ與晚期糖基化終產(chǎn)物受體(Receptor for advanced glycation end products, RAGE)的相互作用導(dǎo)致神經(jīng)元線粒體功能障礙、氧化應(yīng)激、星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的炎癥激活，以及循環(huán)Aβ穿過血腦屏障進(jìn)入大腦。Aβ還通過與TLR2的相互作用誘導(dǎo)神經(jīng)炎癥。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測 樣品中人Amyloid β-Peptide(1-42)的濃度，其原理見圖1。人Amyloid β-Peptide(1-42)特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的人Amyloid β-Peptide(1-42)會與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗人Amyloid β-Peptide(1-42)抗體后，生物素化抗人Amyloid β-Peptide(1-42)抗體與人Amyloid β-Peptide(1-42)結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測。人Amyloid β-Peptide(1-42)濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中靶蛋白濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測，可以進(jìn)行96次檢測。
包裝清單：
產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝
PA082-1
人Amyloid β-Peptide(1-42)抗體預(yù)包被板
8孔×12條
PA082-2
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10ml
PA082-3
人Amyloid β-Peptide(1-42)標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
PA082-4
人Amyloid β-Peptide(1-42)生物素化抗體
10ml
PA082-5
辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
PA082-6
洗滌液(20X)
30ml
PA082-7
TMB溶液
10ml
PA082-8
終止液
5ml
PA082-9
封板膜(透明)
2張
PA082-10
封板膜(白色)
2張
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說明書
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效，試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨(dú)立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測時(shí)，請獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請輕輕晃動整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。