產(chǎn)品編號

JJP80
2019-nCoV Spike Protein RBD ELISA Kit
96次

2070

的2019-nCoV Spike Protein RBD ELISA Kit (2019-nCoV Spike Protein RBD Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即新型冠狀病毒刺突蛋白受體結(jié)合域(2019-nCoV Spike Protein Receptor Binding Domain, S Protein RBD)酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的S Protein RBD的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為52pg/ml。板內(nèi)、板間變異系數(shù)(coefficients of variation, CV)均小于10%。
2019年底由新型冠狀病毒引起的肺炎疫情，從2020年初開始在全球大流行，感染病例快速上升，引發(fā)全球關(guān)注。該病毒被世界衛(wèi)生組織(WHO)命名為2019-nCoV，被國際病毒分類委員會命名為嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)。由新型冠狀病毒導(dǎo)致的疾病，被世界衛(wèi)生組織正式命名為冠狀病毒疾病2019 (Corona Virus Disease 2019, COVID-19），通常稱為新型冠狀病毒肺炎，簡稱“新冠肺炎”。
新型冠狀病毒(2019-nCoV)屬于單正鏈的RNA病毒，與SARS-CoV以及MERS-CoV具有較高的同源性。新型冠狀病毒的基因組包含11個基因，其中功能較為重要的5個基因分別是：ORF1ab基因、S基因、E基因、M基因、N基因。刺突蛋白 (Spike Protein)是冠狀病毒的主要表面抗原，是分子量約為180kD的I型跨膜糖蛋白，在病毒侵襲宿主細(xì)胞過程中發(fā)揮重要生物學(xué)作用。它是一個同源三聚體，由S1和S2亞基組成。在2019-nCoV中，Spike Protein的蛋白水解是S1和S2亞基激活所必需的。2019-nCoV感染的第一步是Spike Protein與宿主細(xì)胞上某些受體的相互作用。S1亞基主要負(fù)責(zé)識別和結(jié)合宿主細(xì)胞表面受體，S2亞基序列相對保守并參與病毒與宿主細(xì)胞膜融合過程, 被認(rèn)為是產(chǎn)生中和抗體的重要抗原區(qū)。受體結(jié)合域(Receptor Binding Domain, RBD)位于S1的C端，可與靶細(xì)胞上的受體血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2 (Angiotensin-Converting Enzyme 2, ACE2)特異性結(jié)合，具有高親和力和快速結(jié)合的能力。研究表明阻斷RBD與ACE2的相互作用可抑制病毒感染，這提示RBD可能是2019-nCoV疫苗或治療的潛在靶點。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中S Protein RBD的濃度，其原理見圖1。S Protein RBD特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時，其中的S Protein RBD會與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗S Protein RBD抗體后，辣根過氧化物酶標(biāo)記抗S Protein RBD抗體與S Protein RBD結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。 最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。S Protein RBD濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中S Protein RBD濃度。

圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測，可以進(jìn)行96次檢測。
包裝清單：

產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝

JJP80-1
2019-nCoV S Protein RBD抗體預(yù)包被板
8孔×12條

JJP80-2
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
20ml

JJP80-3
2019-nCoV S Protein RBD標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶

JJP80-4
辣根過氧化物酶標(biāo)記RBD抗體
10ml

JJP80-5
洗滌液(20X)
30ml

JJP80-6
TMB溶液
10ml

JJP80-7
終止液
5ml

JJP80-8
封板膜(透明)
2張

JJP80-9
封板膜(白色)
2張

—
說明書
1份

保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效，試劑盒其它組分4℃保存6個月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項：
本試劑盒不含會造成病毒感染的試劑，但由于檢測樣品來自于感染或康復(fù)2019-nCoV的患者及未感染的人群(可能為無癥狀感染者)，所以應(yīng)在嚴(yán)格防護(hù)的條件下進(jìn)行檢測。本試劑盒需在生物安全等級Biosafety Level 2 (BSL-2)或更高標(biāo)準(zhǔn)的經(jīng)認(rèn)證的II級生物安全柜中使用。
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。

檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。