產(chǎn)品編號

JP0062
Mouse BAFF/BLyS/TNFSF13B ELISA Kit
96次

3396

的Mouse BAFF/BLyS/TNFSF13B ELISA Kit (Mouse BAFF/BLyS/TNFSF13B Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠B細胞刺激因子酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測小鼠血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液中的BAFF/BLyS/TNFSF13B的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強，重復性好。多次重復檢測結(jié)果表明，最小檢出量為58pg/ml，與小鼠APRIL、BAFF R/Fc Chimera、人BAFF沒有交叉反應。板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
B細胞活化因子(B-cell activating factor, BAFF)，又稱BLyS, TALL-1, THANK和TNFSF13B，是TNF家族成員之一，其具有維持B細胞存活和成熟的功能。小鼠BAFF是一種分子量為32kDa的II型跨膜蛋白，在血液中存在18kDa的游離型BAFF。小鼠BAFF的N端TNF同源區(qū)包含有一個furin酶切位點(RNRR)，經(jīng)酶切作用后即可得到游離型BAFF。多種類型的細胞和組織均能夠產(chǎn)生BAFF，例如單核細胞、巨噬細胞、中性粒細胞、樹突狀細胞、T淋巴細胞、脾臟、淋巴結(jié)和骨髓等。通常BAFF被認為以同型三聚體的形式存在，但有時也會與另一種TNFSF成員APRIL組成雜聚體。
BAFF至少具有3種受體：B細胞成熟抗原(BCMA/TNFRSF17)、跨膜激活劑及鈣調(diào)親環(huán)素配基相互作用因子(TACI/TNFRSF13B)和BAFF受體(BAFF R/BR3/TNFRSF13C)，三者都屬于TNF受體家族。其中TACI和BCMA不僅能夠識別BAFF，也能夠與APRIL相互作用，BAFF R僅能特異性與BAFF結(jié)合。三種受體均主要表達在B細胞表面。BAFF與受體結(jié)合，主要調(diào)控B細胞的存活和成熟。BAFF敲除的小鼠會出現(xiàn)淋巴結(jié)和脾臟中濾泡和邊緣B細胞的減少，但是骨髓細胞和腹膜的B1細胞將不受影響。BAFF的過表達會導致小鼠脾臟和淋巴結(jié)中B細胞數(shù)量升高，并且小鼠會表現(xiàn)出明顯的自身免疫疾病相關特征，例如自身抗體水平升高、腎臟中免疫球蛋白減少和腎小球性腎炎及伴隨的腎功能衰竭。結(jié)合相關臨床數(shù)據(jù)，研究人員認為BAFF有可能能夠成為自身免疫性疾病治療的新靶點。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B的濃度，其原理見圖1。小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B特異的單克隆捕獲抗體已預包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B會與捕獲抗體結(jié)合。當加入生物素化的抗小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B抗體后，生物素化抗小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B抗體與小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B結(jié)合，形成夾心的免疫復合物。隨后加入辣根過氧化物酶標記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中靶蛋白濃度。

圖1.雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：

產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝

JP0062-1
小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B抗體預包被板
8孔×12條

JP0062-2
樣品分析緩沖液
5ml

JP0062-3
標準品稀釋液
10ml

JP0062-4
小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B標準品
2-4瓶

JP0062-5
小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B生物素化抗體
10ml

JP0062-6
辣根過氧化物酶標記Streptavidin
10ml

JP0062-7
洗滌液(20X)
30ml

JP0062-8
TMB溶液
10ml

JP0062-9
終止液
5ml

JP0062-10
封板膜(透明)
2張

JP0062-11
封板膜(白色)
2張

—
說明書
1份

保存條件：
標準品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效，試劑盒其它組分4℃保存6個月內(nèi)有效。除標準品外，試劑盒其它組分嚴禁凍存。
注意事項：
由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以標準品的瓶數(shù)及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標準品的精確性，標準品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應結(jié)果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導致結(jié)果誤差較大。
檢測標準品和樣品時建議設置重復孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。