產(chǎn)品編號

PI470
Human/Rat/Mouse Irisin ELISA Kit
96次

3399

的Human/Rat/Mouse Irisin ELISA Kit (Human/Rat/Mouse Irisin Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人/大鼠/小鼠鳶尾素酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測人/大鼠/小鼠的血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的Irisin的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為119pg/ml，與人FNDC4、IL-20 Rβ、PTS、Lipocalin-2等沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
鳶尾素(Irisin)是2012年被發(fā)現(xiàn)的一種新型肌肉因子，含112個(gè)氨基酸，相對分子質(zhì)量為12000，成熟和人，小鼠和大鼠的鳶尾素的序列完全相同。運(yùn)動的骨骼肌可以通過特殊的效應(yīng)介導(dǎo)骨骼肌中的過氧化物酶體增殖體激活受體γ共激活性因子1α (peroxlsome proliferator-activated receptor-γ coactlvator-1α, PGC1α)促使細(xì)胞膜表面III型纖連蛋白組件包含蛋白5 (fibronectin type III domain containing 5, FNDC5)的表達(dá)，F(xiàn)NDC5經(jīng)酶剪切和修飾形成Irisin并分泌到血液中。FNDC5 mRNA主要表達(dá)于骨骼中，其它含肌肉較多的組織器官如心臟、舌、直腸也表達(dá)較多，大腦、甲狀腺、腎臟、肝臟等組織器官也有一定含量。Irisin能夠結(jié)合白色脂肪組織上的相關(guān)受體促進(jìn)皮下脂肪解偶聯(lián)蛋白1 (uncoupling protein 1, UCP1)基因表達(dá)上調(diào)及誘導(dǎo)白色脂肪組織傾向于棕色脂肪組織轉(zhuǎn)化。棕色脂肪組織在成人體內(nèi)的含量雖然少，但其產(chǎn)熱效率卻極高，被激活的棕色脂肪組織通過快速消耗葡萄糖和脂肪來發(fā)熱。白色脂肪組織的棕色化，有助于增加機(jī)體能量的消耗，減輕體重，表明Irisin在調(diào)節(jié)糖代謝和脂質(zhì)代謝方面有重要作用。Irisin還參與多種疾病的調(diào)控，如肥胖、2型糖尿病、非酒精性脂肪肝、慢性心衰、腫瘤、甲狀腺功能障礙等。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中Irisin的濃度，其原理見圖1。Irisin特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的Irisin會與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗Irisin抗體后，生物素化抗Irisin抗體與Irisin結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測。Irisin濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中靶蛋白濃度。

圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測，可以進(jìn)行96次檢測。
包裝清單：

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱

包裝

PI470-1
Irisin抗體預(yù)包被板
8孔×12條

PI470-2
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(5X)
10ml×2

PI470-3
Irisin標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶

PI470-4
Irisin生物素化抗體
10ml

PI470-5
辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml

PI470-6
洗滌液(20X)
30ml

PI470-7
TMB溶液
10ml

PI470-8
終止液
5ml

PI470-9
封板膜(透明)
2張

PI470-10
封板膜(白色)
2張

—
說明書
1份

保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效，試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨(dú)立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測時(shí)，請獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請輕輕晃動整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。