含Capping結(jié)構(gòu)的高活性mRNA
CleanCap? mRNA
TriLink BioTechnologies開發(fā)的CleanCap? mRNA是一種包被了特定蛋白的加帽mRNA。
本系列產(chǎn)品有Cas9、Cre、EGFP、Luciferase、mCherry、β-gal、EPO、OVA(ovalbumin)可供選擇。
TriLink公司的CleanCap? mRNA能夠作為高活性的mRNA使用,通過Capping(加帽)避免生物體內(nèi)發(fā)生免疫應(yīng)答,改善in vivo條件下的翻譯效率。
◆CleanCap? 是什么?:為mRNA添加Cap 1 結(jié)構(gòu)
TriLink公司的CleanCap? mRNA可以通過在mRNA上添加Capping結(jié)構(gòu)(Cap 1)來(lái)避免生物體內(nèi)發(fā)生免疫應(yīng)答,從而合成具有高翻譯效率的mRNA。
◆TriLink公司的CleanCap? mRNA特點(diǎn)
1. 加帽效率高達(dá)94%+,可獲得更高活性的mRNA。
2. 不會(huì)激活模式識(shí)別受體,可避免免疫應(yīng)答
3. 相較于Cap 0結(jié)構(gòu)(ARCA法加帽),in vivo條件下的翻譯效率得到了大幅改善
4. 相較于酶加帽法,所需成本大幅降低
5. 加帽修飾mRNA產(chǎn)品系列豐富
◆CleanCap?和ARCA(Anti-reverse capping analog)法的比較
將從以下兩點(diǎn)比較ARCA法和CleanCap?加帽的mRNA。
● 加帽效率
● 細(xì)胞內(nèi)蛋白的表達(dá)量
加帽效率的比較
分別使用CleanCap?和ARCA加帽表達(dá)Fluc的mRNA,比較兩者的加帽效率。
結(jié)果顯示,使用CleanCap? 獲得的加帽效率比ARCA法高。
CleanCap?
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ARCA
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90-99%
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60-80%
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細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)水平的比較
分別使用CleanCap?和ARCA法加帽表達(dá)EGFP的mRNA后,使其在細(xì)胞內(nèi)表達(dá),并通過熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。
比較以下5種細(xì)胞:CHO cells、Foreskin fibroblast cells、iPS derived cardiomyoctyes、Jurkat、MCF 10A
結(jié)果顯示,無(wú)論在哪一種細(xì)胞中,使用CleanCap?加帽的EGFP mRNA的蛋白表達(dá)水平都更高。
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ARCA EGFP mRNA
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CleanCap? EGFP mRNA
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CHO Cells
6 minute fusion Fuse-It-mRNA Kit
1μg mRNA 72 h post fusion
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Foreskin fibroblast cells, 10 minute fusion Fuse-It-mRNA Kit 1μg mRNA 24 h post fusion
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iPS derived cardiomyoctyes, 10 minute fusion Fuse-It-mRNA Kit 1μg mRNA 24 h post fusion
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Data courtesy of Beniag
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ARCA EGFP mRNA
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CleanCap? EGFP mRNA
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Jurkat: 500ng mRNA + 1μL jetMESSENGER
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MCF 10A: 500ng mRNA + 1μL jetMESSENGER
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Data courtesy of Polyplus-transfection
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CleanCap?與酶加帽法的制備成本比較
計(jì)算4 mL(2 mg)和1 mL(400 μg)兩種規(guī)格制備加帽mRNA時(shí)所需的成本。
結(jié)果顯示,CleanCap?與酶加帽法相比,生產(chǎn)成本更低。
◆與修飾mRNA的組合:置換尿苷
為使mRNA能夠高效表達(dá),需最大限度地去除mRNA序列中的Uridine(尿苷),并將殘留的Uridine置換為Pseudo Uridine(PseudoU,假尿苷)或5-methoxy Uridine(5moU,5-甲氧基尿苷)。
TriLink公司可提供多種CleanCap?與Pseudo Uridine、5-methoxy Uridine組合的mRNA產(chǎn)品。
Thp-1 Dual Cells (InvivoGen)
準(zhǔn)備2種表達(dá)Fluc的mRNA,正常序列(Standard Fluc)與盡可能去除尿苷的序列(U depleted Fluc),比較兩者的表達(dá)水平。
此外,在沒有進(jìn)行尿苷置換(wt)、置換為Pseudo Uridine(PseudoU)和置換為5-methoxy Uridine(5moU)的條件下進(jìn)行比較。
結(jié)果顯示,在U depleted Fluc(盡可能去除尿苷的序列)和置換為5-methoxy Uridine(5moU:甲氧基尿苷)的序列中,F(xiàn)luc的表達(dá)水平更高。
◆RNA定制合成服務(wù)
TriLink公司可提供RNA定制合成服務(wù):化學(xué)合成短鏈RNA服務(wù)、轉(zhuǎn)錄合成長(zhǎng)鏈RNA。定制項(xiàng)目包含加帽、修飾堿基、緩沖液組成、純化方法開發(fā)等。從使用修飾堿基的向?qū)NA合成到大規(guī)模mRNA合成服務(wù)均可提供,可滿足客戶廣泛的需求。
mRNA定制合成(in vitro轉(zhuǎn)錄合成)的服務(wù)內(nèi)容
目標(biāo)回收量:1 mg~
修飾堿基:Pseudouridine, 5-Methoxyuridine, 5-Methylcytidine/Pseudouridine等
加帽試劑:CleanCap?
定制示例
● 只需ORF序列的mRNA合成
● UTR序列和ORF序列的mRNA合成
歡迎與我們聯(lián)系,進(jìn)一步了解定制服務(wù)。
◆關(guān)于TriLink BioTechnologies
TriLink BioTechnologies是一家位于美國(guó)圣地亞哥的試劑、藥物生產(chǎn)定制公司,專注于核酸、寡核苷酸、加帽類似物的生產(chǎn)和長(zhǎng)鏈RNA合成。
CleanCap? mRNA是TriLink研發(fā)的新型共轉(zhuǎn)錄加帽法,與常規(guī)加帽法相比,可實(shí)現(xiàn)高加帽效率和高蛋白表達(dá)效率。
TriLink生產(chǎn)符合ICH Q7以及ISO 9001:2015。
◆產(chǎn)品列表
Cas9 mRNA
產(chǎn)品編號(hào)
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產(chǎn)品名稱
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產(chǎn)品規(guī)格
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550-33824
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CleanCap Cas9 mRNA
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1 mg
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552-33823
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100 μg
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558-33744
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CleanCap Cas9 mRNA (5moU)
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1 mg
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550-33743
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100 μg
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555-33754
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CleanCap Cas9 Nickase mRNA (5moU)
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1 mg
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551-33751
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20 μg
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557-33753
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100 μg
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Cas9 mRNA是在Broad、MIT、Harvard、Iowa、UTokyo以及Rockefeller授予的限制性許可下提供的產(chǎn)品。
Cre mRNA
產(chǎn)品編號(hào)
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產(chǎn)品名稱
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產(chǎn)品規(guī)格
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555-33793
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CleanCap Cre mRNA (5moU)
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1 mg
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559-33791
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100 μg
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EGFP mRNA
產(chǎn)品編號(hào)
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產(chǎn)品名稱
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產(chǎn)品規(guī)格
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555-33793
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CleanCap EGFP mRNA
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1 mg
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559-33791
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100 μg
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552-33703
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CleanCap EGFP mRNA (5moU)
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1 mg
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556-33701
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100 μg
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mCherry mRNA
產(chǎn)品編號(hào)
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產(chǎn)品名稱
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產(chǎn)品規(guī)格
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556-33723
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CleanCap mCherry mRNA (5moU)
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1 mg
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550-33721
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100 μg
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Luciferase mRNA
產(chǎn)品編號(hào)
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產(chǎn)品名稱
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產(chǎn)品規(guī)格
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555-33813
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CleanCap FLuc mRNA
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1 mg
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559-33811
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100 μg
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559-33713
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CleanCap FLuc mRNA (5moU)
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1 mg
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553-33711
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100 μg
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553-33733
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CleanCap Renilla mRNA (5moU)
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1 mg
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557-33731
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100 μg
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β-gal mRNA
產(chǎn)品編號(hào)
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產(chǎn)品名稱
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產(chǎn)品規(guī)格
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559-33833
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CleanCap beta gal mRNA
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1 mg
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553-33831
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100 μg
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554-33763
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CleanCap beta gal mRNA (5moU)
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1 mg
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558-33761
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100 μg
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EPO mRNA
產(chǎn)品編號(hào)
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產(chǎn)品名稱
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產(chǎn)品規(guī)格
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559-33774
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CleanCap EPO mRNA (5moU)
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1 mg
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551-33773
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100 μg
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OVA mRNA
產(chǎn)品編號(hào)
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產(chǎn)品名稱
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產(chǎn)品規(guī)格
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558-35503
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CleanCap Ova mRNA
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1 mg
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552-35501
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100 μg
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558-33783
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CleanCap Ova mRNA (5moU)
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1 mg
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552-33781
|
100 μg
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◆相關(guān)產(chǎn)品
加帽試劑
產(chǎn)品編號(hào)
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產(chǎn)品名稱
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產(chǎn)品規(guī)格
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559-35511
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CleanCap Reagent AG
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1 μmol
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553-35514
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5 μmol
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555-35513
|
10 μmol
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553-35531
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CleanCap Reagent (3' OMe) AG
|
1 μmol
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557-35534
|
5 μmol
|
559-35533
|
10 μmol
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