SIGMA V900863-100G 明膠 來源于豬皮膚

屬性

生物來源

Porcine skin

等級(jí)

reagent grade

類型

Type A

產(chǎn)品線

Vetec

形式

powder

包裝

poly bottle of 100g
poly bottle of 500g

溶解性

H2O: soluble 50mg/mL, clear to hazy, faintly yellow to yellow

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說明

一般描述

明膠是多種食品和藥品的關(guān)鍵成分,包括果凍、調(diào)味汁、甜點(diǎn)、膠囊、片劑和血液替代品。通常,大多數(shù)明膠產(chǎn)品都是用豬皮制成的。[1]

包裝

100, 500 g in poly bottle

組分

明膠存在于膠原蛋白中,是一種具有高平均分子量的水溶性蛋白質(zhì)的異質(zhì)性混合物。 通過在水中將相關(guān)的皮膚、肌腱、韌帶、骨骼等進(jìn)行煮沸來提取蛋白質(zhì)。 A類明膠來自于酸固化組織。 B類明膠來自于石灰固化組織。

法律信息

Vetec is a trademark of Sigma-Aldrich International GmbH

D型多聚賴氨酸 Poly-D-lysine(PDL) 5 mg/ml(NBS6014)

D型多聚賴氨酸 Poly-D-lysine(PDL) 5 mg/ml

貨號(hào):NBS6014-400ul

規(guī)格:400ul

品牌:JinPan

產(chǎn)品描述

多聚賴氨酸(poly-lysine)是一種帶正電荷的氨基酸聚合物,能夠結(jié)合于DNA,紅細(xì)胞膜或任何帶負(fù)電荷蛋白,是一種非特異性的細(xì)胞粘附因子,促進(jìn)細(xì)胞吸附到固相基質(zhì)上。作用機(jī)理在于其可增強(qiáng)細(xì)胞膜表面的負(fù)電荷離子和固相基質(zhì)表面(如細(xì)胞培養(yǎng)皿,載玻片等)的靜電相互作用。當(dāng)吸附到培養(yǎng)表面后,多聚賴氨酸提高用于細(xì)胞結(jié)合的陽(yáng)離子結(jié)合位點(diǎn)數(shù)。多聚賴氨酸分子量的大小與粘度相關(guān),即分子量較低,粘度較低,使用越容易;分子量較高,粘度較高,提供的粘附位點(diǎn)也較多。分子量>30,000的聚賴氨酸適用于促進(jìn)細(xì)胞粘附到固體基質(zhì)。 

多聚賴氨酸(poly-lysine)有兩種常見亞型,D-和L-型。由于多聚賴氨酸是細(xì)胞結(jié)合的非特異性粘附因子,兩種亞型都可用作包被固體基質(zhì),在細(xì)胞培養(yǎng)中都可促進(jìn)細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng)。據(jù)報(bào)道多聚L-賴氨酸能夠改善蛋白在ELISA培養(yǎng)板上的粘附性。然而細(xì)胞應(yīng)用中,某些細(xì)胞能夠水解多聚L-賴氨酸。此種情況必須使用多聚D-賴氨酸作為粘附因子,從而保護(hù)細(xì)胞不會(huì)因攝取過量L-賴氨酸而被破壞。 

本品為無菌的D型多聚賴氨酸(Poly-D-lysine)溶液,濃度為5mg/ml,分子量為150,000-300,000,可直接稀釋后用于細(xì)胞或組織培養(yǎng)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)。

保存與運(yùn)輸方法

保存:?20°C避光保存,1年穩(wěn)定。

運(yùn)輸:冰袋運(yùn)輸。

注意事項(xiàng)

1)   在某些細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用中,一些細(xì)胞會(huì)消化多聚 L-賴氨酸并吸收,攝入過多的多聚 L-賴氨酸會(huì)產(chǎn)生一定的細(xì)胞毒性。因此,遇到這種情況建議選用D型多聚賴氨酸(Poly-D-lysine)。

2)   本品以氫溴酸(HBr)的形式提供,每個(gè)賴氨酸殘基約含一個(gè)HBr。HBr的存在使得多聚賴氨酸能溶于中性緩沖液,通過透析除去鹽離子。

3)   為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法

1.      細(xì)胞培養(yǎng)用包被基質(zhì)

使用D型多聚賴氨酸進(jìn)行細(xì)胞相關(guān)包被實(shí)驗(yàn),需根據(jù)不同的細(xì)胞系和應(yīng)用進(jìn)行包被條件的優(yōu)化。一般步驟如下:
1)使用無菌組織培養(yǎng)級(jí)水或者PBS將5mg/ml poly-D-lysine儲(chǔ)存液稀釋到最適合自身實(shí)驗(yàn)體系的包被濃度。通常情況下,常用的培養(yǎng)皿/板包被濃度為0.1mg/ml,即將儲(chǔ)存液稀釋50倍后使用。

2)無菌條件下包被細(xì)胞培養(yǎng)板,使用量0.5ml-1.0ml/25cm2。輕輕搖動(dòng)板底以使其覆蓋整個(gè)板面

3)5min后,用槍移除培養(yǎng)板表面溶液,并用無菌組織培養(yǎng)級(jí)水或者PBS清洗板面;【注意】:有的情況需要1~2h來完成鋪板,有的時(shí)候需要過夜鋪板。依情況而定。

4)至少干燥2h后,方可進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。

【注意】:如果多聚賴氨酸包被后的玻璃器皿或玻片必須除菌,可用γ-射線照射(而非高壓滅菌)對(duì)其進(jìn)行除菌。

【注意】:如果包被表面不平整,可用1mM醋酸鎂預(yù)處理玻璃載玻片2-3h,徹底清洗干凈后再開始包被?;蛘撸Aлd玻片用酸清洗(鹽酸或硫酸),經(jīng)此處理能讓多聚賴氨酸溶液包被很平整。

 

2.      組織學(xué)研究(玻片的包被)

使用無菌組織培養(yǎng)級(jí)水或者PBS將5mg/ml poly-D-lysine儲(chǔ)存液稀釋到最適合自身實(shí)驗(yàn)體系的包被濃度,一般推薦0.1%(w/v)的poly-D-lysine溶液用于組織學(xué)玻片的制備。

將玻片用相應(yīng)濃度的多聚賴氨酸溶液處理5min后,清洗玻片并將其室溫過夜干燥或者在約60℃的烤箱內(nèi)烘干~1h?!咀⒁狻浚捍斯ぷ魅芤貉b在塑料瓶中于4℃保存,并限制使用次數(shù)在4次以內(nèi)。


EZ poly™S轉(zhuǎn)染試劑(NBS0213)

EZ polyS轉(zhuǎn)染試劑

 

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

包裝規(guī)格

NBS0213-0.5ml

EZ polyS轉(zhuǎn)染試劑

0.5ml

NBS0213-1ml

EZ polyS轉(zhuǎn)染試劑

1ml

NBS0213-5ml

EZ polyS轉(zhuǎn)染試劑

5x1ml

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

EZ polyS轉(zhuǎn)染試劑是一款專用于懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染的DNA轉(zhuǎn)染試劑,可用于質(zhì)粒DNA在懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞中的傳送。它適用于大規(guī)模蛋白生產(chǎn),及工業(yè)化生產(chǎn)中的真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染。具有不受血清影響、毒性低、穩(wěn)定性好、轉(zhuǎn)染簡(jiǎn)單易行、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。

 

應(yīng)用范圍:

EZ polyS轉(zhuǎn)染試劑特別適用于293FCHO-S等懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。在有血清和無血清的條件下,均可得到較高的轉(zhuǎn)染效率,且重復(fù)性好。在大規(guī)模蛋白生產(chǎn)中,操作簡(jiǎn)單、蛋白表達(dá)量高、細(xì)胞毒性低、細(xì)胞通用性好。

 

保存條件

2-8℃保存一年

 

運(yùn)輸

常溫運(yùn)輸

 

質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染:

100mL培養(yǎng)瓶為例,請(qǐng)參考1的轉(zhuǎn)染規(guī)模調(diào)整,步驟如下:

 

1

細(xì)胞接種: 0.2~0.5×106/mL個(gè)細(xì)胞,接種于20mL培養(yǎng)基中。在37℃,120rpm,5%CO2的條件下培養(yǎng)。

2

質(zhì)粒稀釋: 10 μg質(zhì)粒稀釋于Opti-MEM培養(yǎng)基中,終體積50 μL。

3

轉(zhuǎn)染試劑稀釋: 20μLEZ polyS轉(zhuǎn)染試劑加入到30μL Opti-MEM培養(yǎng)基中,稀釋后的終體積為50μL

4

復(fù)合物制備:將上述質(zhì)粒DNA稀釋液和轉(zhuǎn)染試劑稀釋液混合,輕輕吹打均勻后,室溫靜置10分鐘

5

將上述100μL復(fù)合物加入到細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,繼續(xù)搖動(dòng)培養(yǎng)培養(yǎng)18~48小時(shí)后檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,無需更換培養(yǎng)基

質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染優(yōu)化:

可通過改變細(xì)胞密度、 DNA濃度以及EZ polyS轉(zhuǎn)染試劑濃度對(duì)轉(zhuǎn)染進(jìn)行優(yōu)化。EZ polyS 轉(zhuǎn)染試劑(μL): DNA (μg)可以在1:15:1之間調(diào)整。轉(zhuǎn)染大于48h后,可通過適量添加培養(yǎng)基的方式延長(zhǎng)轉(zhuǎn)染時(shí)間。

 

1. 不同培養(yǎng)瓶所需轉(zhuǎn)染試劑和DNA的用量

培養(yǎng)瓶

細(xì)胞數(shù)量

接種

培養(yǎng)基

Opti-MEM

稀釋后終體積

DNA轉(zhuǎn)染

試劑用量

DNA

50mL

0.5×106/mL

10mL

50μL

10μL

5μg

100mL

0.5×106/mL

20mL

100μL

20μL

10μg

250mL

0.5×106/mL

50mL

200μL

50μL

25μg

500mL

0.5×106/mL

100mL

400μL

100μL

50μg

1L

0.5×106/mL

200mL

2mL

200μL

100μg

5L

0.5×106/mL

1L

4mL

1mL

500μg

 

EZ poly™S轉(zhuǎn)染試劑(NBS0213) 

一:轉(zhuǎn)染效率低

影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素有很多。首先,與所轉(zhuǎn)染細(xì)胞有關(guān),有的細(xì)胞容易轉(zhuǎn)染,如HeLa、B16F10、293T等。有的細(xì)胞不易轉(zhuǎn)染,如4T1、NIH3T3、BMDC等。其次,與轉(zhuǎn)染試劑的用量及與DNA的比例有關(guān),在最佳的轉(zhuǎn)染比例附近可以達(dá)到最佳的轉(zhuǎn)染效果。最后,沒有使用最適宜的細(xì)胞密度,應(yīng)根據(jù)各種轉(zhuǎn)染試劑的說明書中推薦的細(xì)胞密度進(jìn)行細(xì)胞接種,更有利于提高轉(zhuǎn)染效率。


二:轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定,不能重現(xiàn)

轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定一般與兩個(gè)因素緊密相關(guān),一個(gè)是轉(zhuǎn)染試劑的穩(wěn)定性,另一個(gè)是基因的穩(wěn)定性。轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)按照說明書建議的保存溫度及條件進(jìn)行保存。如使用脂質(zhì)體類的轉(zhuǎn)染試劑,則不建議反復(fù)凍融,會(huì)引起該轉(zhuǎn)染試劑結(jié)構(gòu)上的變化。基因如短時(shí)間內(nèi)連續(xù)使用,可放置于4℃保存。若超過10天不使用,建議置于-20℃或-80℃長(zhǎng)期儲(chǔ)存以降低核酸的降解速度。


三:細(xì)胞毒性大

導(dǎo)致轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞毒性大的因素有很多,例如DNA的用量過大、轉(zhuǎn)染試劑的用量過大、轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞狀態(tài)較差以及培養(yǎng)基中抗生素的加入等。建議嚴(yán)格按照所選擇轉(zhuǎn)染試劑的說明書進(jìn)行操作,以避免細(xì)胞毒性大的問題。

四:沒有生成高效率的DNA轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物

沒有生成高效復(fù)合物的因素有很多。首先,可能是沒有選對(duì)合適的轉(zhuǎn)染試劑。挑選轉(zhuǎn)染試劑時(shí)應(yīng)考慮基因的種類及分子量等因素。其次,有的轉(zhuǎn)染試劑對(duì)血清的影響很大,應(yīng)在無血清情況下進(jìn)行轉(zhuǎn)染。使用諾寧生物的EZ poly™  系列轉(zhuǎn)染試劑無需考慮血清對(duì)轉(zhuǎn)染體系的影響,可在含血清培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

五:使用錯(cuò)誤的轉(zhuǎn)染操作步驟

無論使用哪一款基因轉(zhuǎn)染試劑,都應(yīng)嚴(yán)格按照該轉(zhuǎn)染試劑的說明書進(jìn)行操作,其中包括轉(zhuǎn)染試劑的用量、基因用量、最佳轉(zhuǎn)染比例、孵育時(shí)間、檢測(cè)時(shí)間等重要因素。

六:轉(zhuǎn)染試劑有時(shí)呈云霧狀渾濁

如發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染試劑出現(xiàn)云霧狀渾濁應(yīng)立即聯(lián)系客服人員?;蜣D(zhuǎn)染試劑一般都呈清澈透明狀態(tài),呈云霧狀渾濁可能是由于轉(zhuǎn)染試劑發(fā)生了污染或儲(chǔ)存溫度太低,請(qǐng)務(wù)必按照試劑說明書要求的溫度進(jìn)行儲(chǔ)存。如出現(xiàn)此現(xiàn)象,建議溫浴10分鐘后,觀察是否澄清。


七:轉(zhuǎn)染復(fù)合物出現(xiàn)沉淀

當(dāng)轉(zhuǎn)染試劑和基因的用量都高于說明書用量,或復(fù)合物的孵育體系體積小于說明書建議時(shí),由于體系中過量的電荷發(fā)生了聚集會(huì)導(dǎo)致體系中的復(fù)合物出現(xiàn)沉淀。建議要嚴(yán)格參考說明書的用量進(jìn)行轉(zhuǎn)染。


八:siRNA轉(zhuǎn)染時(shí),基因沉默效率不夠高

影響siRNA沉默效率的因素很多,如基因本身是否被環(huán)境中的RNA酶污染降解?或所使用的細(xì)胞是否為難轉(zhuǎn)染細(xì)胞?以及是否按照說明書建議的用量進(jìn)行了操作等。首先應(yīng)該選擇合適的siRNA基因轉(zhuǎn)染試劑,確保細(xì)胞密度在60-70%之間,并嚴(yán)格按照說明書建議的用量去使用操作。


九:DNA-siRNA共轉(zhuǎn)染時(shí),基因沉默效率不夠高

當(dāng)細(xì)胞同時(shí)轉(zhuǎn)染DNA和siRNA時(shí),建議使用分別轉(zhuǎn)染的方式進(jìn)行。即使用基因轉(zhuǎn)染試劑分別與DNA和siRNA進(jìn)行復(fù)合,再將兩個(gè)復(fù)合物體系分兩次分別加入到同一個(gè)裝有細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)孔中。因DNA和RNA的轉(zhuǎn)染機(jī)理不相同,如只想使用一種轉(zhuǎn)染試劑同時(shí)轉(zhuǎn)染兩種基因,建議一定要使用通用型基因轉(zhuǎn)染試劑,如EZ poly™ 系列的DNA/RNA產(chǎn)品,即可以轉(zhuǎn)染DNA又可以轉(zhuǎn)染RNA。

EZ poly™RNA轉(zhuǎn)染試劑(NBS9425)

EZ polyRNA轉(zhuǎn)染試劑

 

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

包裝規(guī)格

NBS9425-0.5ml

EZ polyRNA轉(zhuǎn)染試劑

0.5ml

NBS9425-1ml

EZ polyRNA轉(zhuǎn)染試劑

1ml

NBS9425-5ml

EZ polyRNA轉(zhuǎn)染試劑

5x1ml

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

EZ polyRNA轉(zhuǎn)染試劑是一款新型、性能穩(wěn)定的siRNA專用轉(zhuǎn)染試劑,它具有較強(qiáng)的壓縮RNA的能力,能夠把RNA高效率、迅速地轉(zhuǎn)染到真核細(xì)胞之中,而不被核酸酶降解。與其他轉(zhuǎn)染試劑相比,具有毒性低、穩(wěn)定性好、耐血清能力強(qiáng)、轉(zhuǎn)染簡(jiǎn)單易行、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。

 

應(yīng)用范圍:

EZ polyRNA轉(zhuǎn)染試劑可適用于眾多原代培養(yǎng)和轉(zhuǎn)化細(xì)胞株的siRNA轉(zhuǎn)染。沉默效率高且性能穩(wěn)定,在有無血清存在的細(xì)胞培養(yǎng)基中均能獲得非常理想的基因沉默效果。

 

保存條件

2-8℃保存一年

 

運(yùn)輸

常溫運(yùn)輸

 

siRNA的轉(zhuǎn)染:

24孔板為例,請(qǐng)參考1的轉(zhuǎn)染規(guī)模調(diào)整,步驟如下:

1

細(xì)胞接種: 每孔接種0.5~1.0×105個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞培養(yǎng)12~24小時(shí),使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度達(dá)到60~70%融合度

2

siRNA稀釋: 15pmolsiRNA稀釋于Opti-MEM培養(yǎng)基中,終體積10 μL

3

轉(zhuǎn)染試劑稀釋: 1μLEZ polyRNA轉(zhuǎn)染試劑加入到9μL Opti-MEM培養(yǎng)基中,稀釋后的終體積為10μL

4

復(fù)合物制備:將上述siRNA稀釋液和轉(zhuǎn)染試劑稀釋液混合,輕輕吹打均勻后,室溫靜置10分鐘

5

將上述20μL復(fù)合物加入到24孔板中,輕輕吹打混勻,繼續(xù)培養(yǎng)18~48小時(shí)后檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,無需更換培養(yǎng)基

 

siRNA轉(zhuǎn)染的優(yōu)化:

可通過改變細(xì)胞密度、siRNA濃度以及EZ polyRNA濃度對(duì)轉(zhuǎn)染進(jìn)行優(yōu)化。保證細(xì)胞融合度在60%以上,EZ polyRNA (μL):   siRNA(pmol)可以在0.02:10.15:1之間調(diào)整。

 

1.  不同培養(yǎng)板所需轉(zhuǎn)染試劑和siRNA的用量

 

培養(yǎng)板

單孔面積

接種

培養(yǎng)基

Opti-MEM

稀釋后終體積

siRNA轉(zhuǎn)染

試劑用量

siRNA

96孔板

0.3cm2

200μL

10μL

0.5μL

7.5pmol

24孔板

2.0cm2

500μL

20μL

1.0μL

15pmol

12孔板

4.0cm2

1mL

40μL

2.0μL

30pmol

6孔板

10.0cm2

2mL

100μL

4.0μL

60pmol

EZ poly™RNA轉(zhuǎn)染試劑(NBS9425) 

一:轉(zhuǎn)染效率低

影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素有很多。首先,與所轉(zhuǎn)染細(xì)胞有關(guān),有的細(xì)胞容易轉(zhuǎn)染,如HeLa、B16F10、293T等。有的細(xì)胞不易轉(zhuǎn)染,如4T1、NIH3T3、BMDC等。其次,與轉(zhuǎn)染試劑的用量及與DNA的比例有關(guān),在最佳的轉(zhuǎn)染比例附近可以達(dá)到最佳的轉(zhuǎn)染效果。最后,沒有使用最適宜的細(xì)胞密度,應(yīng)根據(jù)各種轉(zhuǎn)染試劑的說明書中推薦的細(xì)胞密度進(jìn)行細(xì)胞接種,更有利于提高轉(zhuǎn)染效率。


二:轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定,不能重現(xiàn)

轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定一般與兩個(gè)因素緊密相關(guān),一個(gè)是轉(zhuǎn)染試劑的穩(wěn)定性,另一個(gè)是基因的穩(wěn)定性。轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)按照說明書建議的保存溫度及條件進(jìn)行保存。如使用脂質(zhì)體類的轉(zhuǎn)染試劑,則不建議反復(fù)凍融,會(huì)引起該轉(zhuǎn)染試劑結(jié)構(gòu)上的變化?;蛉缍虝r(shí)間內(nèi)連續(xù)使用,可放置于4℃保存。若超過10天不使用,建議置于-20℃或-80℃長(zhǎng)期儲(chǔ)存以降低核酸的降解速度。


三:細(xì)胞毒性大

導(dǎo)致轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞毒性大的因素有很多,例如DNA的用量過大、轉(zhuǎn)染試劑的用量過大、轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞狀態(tài)較差以及培養(yǎng)基中抗生素的加入等。建議嚴(yán)格按照所選擇轉(zhuǎn)染試劑的說明書進(jìn)行操作,以避免細(xì)胞毒性大的問題。

四:沒有生成高效率的DNA轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物

沒有生成高效復(fù)合物的因素有很多。首先,可能是沒有選對(duì)合適的轉(zhuǎn)染試劑。挑選轉(zhuǎn)染試劑時(shí)應(yīng)考慮基因的種類及分子量等因素。其次,有的轉(zhuǎn)染試劑對(duì)血清的影響很大,應(yīng)在無血清情況下進(jìn)行轉(zhuǎn)染。使用諾寧生物的EZ poly™  系列轉(zhuǎn)染試劑無需考慮血清對(duì)轉(zhuǎn)染體系的影響,可在含血清培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

五:使用錯(cuò)誤的轉(zhuǎn)染操作步驟

無論使用哪一款基因轉(zhuǎn)染試劑,都應(yīng)嚴(yán)格按照該轉(zhuǎn)染試劑的說明書進(jìn)行操作,其中包括轉(zhuǎn)染試劑的用量、基因用量、最佳轉(zhuǎn)染比例、孵育時(shí)間、檢測(cè)時(shí)間等重要因素。

六:轉(zhuǎn)染試劑有時(shí)呈云霧狀渾濁

如發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染試劑出現(xiàn)云霧狀渾濁應(yīng)立即聯(lián)系客服人員?;蜣D(zhuǎn)染試劑一般都呈清澈透明狀態(tài),呈云霧狀渾濁可能是由于轉(zhuǎn)染試劑發(fā)生了污染或儲(chǔ)存溫度太低,請(qǐng)務(wù)必按照試劑說明書要求的溫度進(jìn)行儲(chǔ)存。如出現(xiàn)此現(xiàn)象,建議溫浴10分鐘后,觀察是否澄清。


七:轉(zhuǎn)染復(fù)合物出現(xiàn)沉淀

當(dāng)轉(zhuǎn)染試劑和基因的用量都高于說明書用量,或復(fù)合物的孵育體系體積小于說明書建議時(shí),由于體系中過量的電荷發(fā)生了聚集會(huì)導(dǎo)致體系中的復(fù)合物出現(xiàn)沉淀。建議要嚴(yán)格參考說明書的用量進(jìn)行轉(zhuǎn)染。


八:siRNA轉(zhuǎn)染時(shí),基因沉默效率不夠高

影響siRNA沉默效率的因素很多,如基因本身是否被環(huán)境中的RNA酶污染降解?或所使用的細(xì)胞是否為難轉(zhuǎn)染細(xì)胞?以及是否按照說明書建議的用量進(jìn)行了操作等。首先應(yīng)該選擇合適的siRNA基因轉(zhuǎn)染試劑,確保細(xì)胞密度在60-70%之間,并嚴(yán)格按照說明書建議的用量去使用操作。


九:DNA-siRNA共轉(zhuǎn)染時(shí),基因沉默效率不夠高

當(dāng)細(xì)胞同時(shí)轉(zhuǎn)染DNA和siRNA時(shí),建議使用分別轉(zhuǎn)染的方式進(jìn)行。即使用基因轉(zhuǎn)染試劑分別與DNA和siRNA進(jìn)行復(fù)合,再將兩個(gè)復(fù)合物體系分兩次分別加入到同一個(gè)裝有細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)孔中。因DNA和RNA的轉(zhuǎn)染機(jī)理不相同,如只想使用一種轉(zhuǎn)染試劑同時(shí)轉(zhuǎn)染兩種基因,建議一定要使用通用型基因轉(zhuǎn)染試劑,如EZ poly™ 系列的DNA/RNA產(chǎn)品,即可以轉(zhuǎn)染DNA又可以轉(zhuǎn)染RNA。

EZ poly™in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑(NBS2122)

EZ poly™in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑

 

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

包裝規(guī)格

NBS2122-0.5ml

EZ poly™in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑

0.5ml

NBS2122-1ml

EZ poly™in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑

1ml

NBS2122-5ml

EZ poly™in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑

5x1ml

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

EZ poly™in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑是一款體內(nèi)專用型基因轉(zhuǎn)染試劑,可通過肌肉注射的方式將mRNA遞送傳送至體內(nèi)并在注射部位高效表達(dá)目的蛋白。與其它mRNA專用體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑相比,具有操作簡(jiǎn)便、體內(nèi)毒性低、穩(wěn)定性好、體內(nèi)轉(zhuǎn)染效率及蛋白表達(dá)量高等優(yōu)點(diǎn)。

 

應(yīng)用范圍:

EZ poly™in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑可被應(yīng)用于mRNA疫苗研發(fā)或基因治療等相關(guān)工作的研究中。可用于遞送熒光標(biāo)記的mRNA或具有特殊功能的mRNA,并在體內(nèi)高效表達(dá)??蓾M足基礎(chǔ)科研、初期工藝開發(fā)及臨床前實(shí)驗(yàn)研究使用。

 

保存條件

2-8℃保存一年

 

運(yùn)輸

常溫運(yùn)輸

 

體內(nèi)轉(zhuǎn)染方法:

以體重20g小鼠,mRNA注射10μg為例,參考1調(diào)整,步驟如下:

 

1

試劑準(zhǔn)備按照1用量首先取30 μL EZ poly™in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑放置于樣品管中

2

復(fù)合物制備10μLmRNA(濃度為1μg/μL)與轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行直接復(fù)合

3

室溫靜止20分鐘

4

補(bǔ)加葡萄糖注射液80μL的葡萄糖注射液加入到上面復(fù)合物溶液中

5

通過肌肉注射的方式,注射于鼠體內(nèi),6~24小時(shí)后檢測(cè)mRNA在鼠體內(nèi)的蓄積或表達(dá)

 

體內(nèi)轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化:

可通過改變mRNA的用量和濃度以及EZ poly™in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑濃度對(duì)體內(nèi)分布或蛋白表達(dá)情況進(jìn)行優(yōu)化。EZ poly™in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑(μL): mRNA (μg)可以在4:12:1之間調(diào)整。根據(jù)鼠體重的不同,葡萄糖注射液的補(bǔ)加體積可以在推薦量±30μL之間調(diào)節(jié)。優(yōu)化方法參考2。使用熒光標(biāo)記mRNA的活體分布實(shí)驗(yàn),建議在注射后4-6小時(shí)開始檢測(cè),熒光素酶標(biāo)記mRNA的活體分布實(shí)驗(yàn),建議在注射后6小時(shí)開始檢測(cè)。

  

1.  不同體重鼠的體內(nèi)用量推薦

 

鼠體重

葡萄糖注射液

補(bǔ)加體積

葡萄糖注射液

釋后終體積

mRNA推薦用量

試劑用量

mRNA

15g

88 μL

120 μL

24μL

8 μg

20g

80 μL

120 μL

30 μL

10 μg

25g

72 μL

120 μL

36 μL

12 μg

30g

60 μL

120 μL

45 μL

15 μg

 

2.  體重20g鼠的優(yōu)化復(fù)合方式推薦

 

鼠體重

葡萄糖注射液

補(bǔ)加體積

葡萄糖注射液

釋后終體積

mRNA推薦用量

試劑用量

mRNA

20g

112 μL

120 μL

6 μL

2 μg

20g

100 μL

120 μL

15 μL

5 μg

20g

80 μL

120 μL

30 μL

10 μg

20g

40 μL

120 μL

60 μL

20 μg

 

一:轉(zhuǎn)染效率低

影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素有很多。首先,與所轉(zhuǎn)染細(xì)胞有關(guān),有的細(xì)胞容易轉(zhuǎn)染,如HeLa、B16F10、293T等。有的細(xì)胞不易轉(zhuǎn)染,如4T1、NIH3T3、BMDC等。其次,與轉(zhuǎn)染試劑的用量及與DNA的比例有關(guān),在最佳的轉(zhuǎn)染比例附近可以達(dá)到最佳的轉(zhuǎn)染效果。最后,沒有使用最適宜的細(xì)胞密度,應(yīng)根據(jù)各種轉(zhuǎn)染試劑的說明書中推薦的細(xì)胞密度進(jìn)行細(xì)胞接種,更有利于提高轉(zhuǎn)染效率。


二:轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定,不能重現(xiàn)

轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定一般與兩個(gè)因素緊密相關(guān),一個(gè)是轉(zhuǎn)染試劑的穩(wěn)定性,另一個(gè)是基因的穩(wěn)定性。轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)按照說明書建議的保存溫度及條件進(jìn)行保存。如使用脂質(zhì)體類的轉(zhuǎn)染試劑,則不建議反復(fù)凍融,會(huì)引起該轉(zhuǎn)染試劑結(jié)構(gòu)上的變化。基因如短時(shí)間內(nèi)連續(xù)使用,可放置于4℃保存。若超過10天不使用,建議置于-20℃或-80℃長(zhǎng)期儲(chǔ)存以降低核酸的降解速度。


三:細(xì)胞毒性大

導(dǎo)致轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞毒性大的因素有很多,例如DNA的用量過大、轉(zhuǎn)染試劑的用量過大、轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞狀態(tài)較差以及培養(yǎng)基中抗生素的加入等。建議嚴(yán)格按照所選擇轉(zhuǎn)染試劑的說明書進(jìn)行操作,以避免細(xì)胞毒性大的問題。

四:沒有生成高效率的DNA轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物

沒有生成高效復(fù)合物的因素有很多。首先,可能是沒有選對(duì)合適的轉(zhuǎn)染試劑。挑選轉(zhuǎn)染試劑時(shí)應(yīng)考慮基因的種類及分子量等因素。其次,有的轉(zhuǎn)染試劑對(duì)血清的影響很大,應(yīng)在無血清情況下進(jìn)行轉(zhuǎn)染。使用諾寧生物的EZ poly™  系列轉(zhuǎn)染試劑無需考慮血清對(duì)轉(zhuǎn)染體系的影響,可在含血清培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

五:使用錯(cuò)誤的轉(zhuǎn)染操作步驟

無論使用哪一款基因轉(zhuǎn)染試劑,都應(yīng)嚴(yán)格按照該轉(zhuǎn)染試劑的說明書進(jìn)行操作,其中包括轉(zhuǎn)染試劑的用量、基因用量、最佳轉(zhuǎn)染比例、孵育時(shí)間、檢測(cè)時(shí)間等重要因素。

六:轉(zhuǎn)染試劑有時(shí)呈云霧狀渾濁

如發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染試劑出現(xiàn)云霧狀渾濁應(yīng)立即聯(lián)系客服人員?;蜣D(zhuǎn)染試劑一般都呈清澈透明狀態(tài),呈云霧狀渾濁可能是由于轉(zhuǎn)染試劑發(fā)生了污染或儲(chǔ)存溫度太低,請(qǐng)務(wù)必按照試劑說明書要求的溫度進(jìn)行儲(chǔ)存。如出現(xiàn)此現(xiàn)象,建議溫浴10分鐘后,觀察是否澄清。


七:轉(zhuǎn)染復(fù)合物出現(xiàn)沉淀

當(dāng)轉(zhuǎn)染試劑和基因的用量都高于說明書用量,或復(fù)合物的孵育體系體積小于說明書建議時(shí),由于體系中過量的電荷發(fā)生了聚集會(huì)導(dǎo)致體系中的復(fù)合物出現(xiàn)沉淀。建議要嚴(yán)格參考說明書的用量進(jìn)行轉(zhuǎn)染。


八:siRNA轉(zhuǎn)染時(shí),基因沉默效率不夠高

影響siRNA沉默效率的因素很多,如基因本身是否被環(huán)境中的RNA酶污染降解?或所使用的細(xì)胞是否為難轉(zhuǎn)染細(xì)胞?以及是否按照說明書建議的用量進(jìn)行了操作等。首先應(yīng)該選擇合適的siRNA基因轉(zhuǎn)染試劑,確保細(xì)胞密度在60-70%之間,并嚴(yán)格按照說明書建議的用量去使用操作。


九:DNA-siRNA共轉(zhuǎn)染時(shí),基因沉默效率不夠高

當(dāng)細(xì)胞同時(shí)轉(zhuǎn)染DNA和siRNA時(shí),建議使用分別轉(zhuǎn)染的方式進(jìn)行。即使用基因轉(zhuǎn)染試劑分別與DNA和siRNA進(jìn)行復(fù)合,再將兩個(gè)復(fù)合物體系分兩次分別加入到同一個(gè)裝有細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)孔中。因DNA和RNA的轉(zhuǎn)染機(jī)理不相同,如只想使用一種轉(zhuǎn)染試劑同時(shí)轉(zhuǎn)染兩種基因,建議一定要使用通用型基因轉(zhuǎn)染試劑,如EZ poly™ 系列的DNA/RNA產(chǎn)品,即可以轉(zhuǎn)染DNA又可以轉(zhuǎn)染RNA。

EZ poly™mRNA轉(zhuǎn)染試劑(NBS2052)

EZ polymRNA轉(zhuǎn)染試劑

 

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

包裝規(guī)格

NBS2052-0.5ml

EZ polymRNA轉(zhuǎn)染試劑

0.5ml

NBS2052-1ml

EZ polymRNA轉(zhuǎn)染試劑

1ml

NBS2052-5ml

EZ polymRNA轉(zhuǎn)染試劑

5x1ml

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

EZ polymRNA轉(zhuǎn)染試劑是一款高性能的mRNA專用轉(zhuǎn)染試劑,可用于mRNA在多種貼壁細(xì)胞中的傳送??芍苯訉?span>mRNA傳遞到細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行表達(dá),避免了轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用及進(jìn)入細(xì)胞核的限制??杀粦?yīng)用在短期蛋白表達(dá)的相關(guān)研究工作中。

 

應(yīng)用范圍:

EZ polymRNA轉(zhuǎn)染試劑可適用于眾多貼壁或懸浮細(xì)胞株的mRNA轉(zhuǎn)染。在各種常規(guī)、難轉(zhuǎn)、原代細(xì)胞及干細(xì)胞中均可得到較高的轉(zhuǎn)染效率,且性能穩(wěn)定。與其它轉(zhuǎn)染試劑相比,具有不受血清影響、毒性低、穩(wěn)定性好、轉(zhuǎn)染簡(jiǎn)單易行、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。

 

保存條件

2-8℃保存一年

 

運(yùn)輸

常溫運(yùn)輸

 

mRNA的轉(zhuǎn)染:

  24孔板為例,請(qǐng)參考1的轉(zhuǎn)染規(guī)模調(diào)整,步驟如下:

  

1

細(xì)胞接種: 每孔接種0 . 5 ~ 1 . 0 × 105 個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞培養(yǎng) 12~24小時(shí),使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度達(dá)到60~70%融合度

2

mRNA稀釋: 0.5μgmRNA加入到Opti-MEM培養(yǎng)基中,稀釋后的終體積為10μL

3

轉(zhuǎn)染試劑稀釋: 1μLEZ polymRNA轉(zhuǎn)染試劑加入到9μL Opti-MEM培養(yǎng)基中,稀釋后的終體積為10μL

4

復(fù)合物制備:將上述mRNA稀釋液和轉(zhuǎn)染試劑稀釋液混合,輕輕吹打均勻后,室溫靜置10分鐘

5

將上述20μL復(fù)合物加入到24孔板中,輕輕吹打混勻,繼續(xù)培養(yǎng)18~48小時(shí)后檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,無需更換培養(yǎng)基

mRNA的轉(zhuǎn)染優(yōu)化:

可通過改變細(xì)胞密度、mRNA濃度以及EZ polymRNA轉(zhuǎn)染試劑濃度對(duì)轉(zhuǎn)染進(jìn)行優(yōu)化。保證細(xì)胞融合度在60%以上,EZ polymRNA轉(zhuǎn)染試劑(μL): mRNA (μg)可以在1:15:1之間調(diào)整。轉(zhuǎn)染步驟與DNA相同,請(qǐng)參考1的轉(zhuǎn)染規(guī)模進(jìn)行調(diào)整,所有數(shù)量和體積均是按孔計(jì)算。轉(zhuǎn)染高密度細(xì)胞可獲得高轉(zhuǎn)染效率、高表達(dá)水平和低細(xì)胞毒性。

  

1.  不同培養(yǎng)板所需轉(zhuǎn)染試劑和mRNA的用量

培養(yǎng)板

單孔面積

接種

培養(yǎng)基

Opti-MEM

養(yǎng)基釋后終體積

mRNA轉(zhuǎn)染

試劑用量

mRNA

96孔板

0.3cm2

200μL

10μL

0.4μL

0.2μg

24孔板

2.0cm2

500μL

20μL

1.0μL

0.5μg

12孔板

4.0cm2

1mL

40μL

2.0μL

1.0μg

6孔板

10.0cm2

2mL

100μL

4.0μL

2.0μg

60mm

20.0cm2

5mL

0.2mL

8.0μL

4.0μg

100mm

60.0cm2

15mL

0.6mL

24.0μL

12.0μg

EZ poly™mRNA轉(zhuǎn)染試劑(NBS2052) 

一:轉(zhuǎn)染效率低

影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素有很多。首先,與所轉(zhuǎn)染細(xì)胞有關(guān),有的細(xì)胞容易轉(zhuǎn)染,如HeLa、B16F10、293T等。有的細(xì)胞不易轉(zhuǎn)染,如4T1、NIH3T3、BMDC等。其次,與轉(zhuǎn)染試劑的用量及與DNA的比例有關(guān),在最佳的轉(zhuǎn)染比例附近可以達(dá)到最佳的轉(zhuǎn)染效果。最后,沒有使用最適宜的細(xì)胞密度,應(yīng)根據(jù)各種轉(zhuǎn)染試劑的說明書中推薦的細(xì)胞密度進(jìn)行細(xì)胞接種,更有利于提高轉(zhuǎn)染效率。


二:轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定,不能重現(xiàn)

轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定一般與兩個(gè)因素緊密相關(guān),一個(gè)是轉(zhuǎn)染試劑的穩(wěn)定性,另一個(gè)是基因的穩(wěn)定性。轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)按照說明書建議的保存溫度及條件進(jìn)行保存。如使用脂質(zhì)體類的轉(zhuǎn)染試劑,則不建議反復(fù)凍融,會(huì)引起該轉(zhuǎn)染試劑結(jié)構(gòu)上的變化?;蛉缍虝r(shí)間內(nèi)連續(xù)使用,可放置于4℃保存。若超過10天不使用,建議置于-20℃或-80℃長(zhǎng)期儲(chǔ)存以降低核酸的降解速度。


三:細(xì)胞毒性大

導(dǎo)致轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞毒性大的因素有很多,例如DNA的用量過大、轉(zhuǎn)染試劑的用量過大、轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞狀態(tài)較差以及培養(yǎng)基中抗生素的加入等。建議嚴(yán)格按照所選擇轉(zhuǎn)染試劑的說明書進(jìn)行操作,以避免細(xì)胞毒性大的問題。

四:沒有生成高效率的DNA轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物

沒有生成高效復(fù)合物的因素有很多。首先,可能是沒有選對(duì)合適的轉(zhuǎn)染試劑。挑選轉(zhuǎn)染試劑時(shí)應(yīng)考慮基因的種類及分子量等因素。其次,有的轉(zhuǎn)染試劑對(duì)血清的影響很大,應(yīng)在無血清情況下進(jìn)行轉(zhuǎn)染。使用諾寧生物的EZ poly™  系列轉(zhuǎn)染試劑無需考慮血清對(duì)轉(zhuǎn)染體系的影響,可在含血清培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

五:使用錯(cuò)誤的轉(zhuǎn)染操作步驟

無論使用哪一款基因轉(zhuǎn)染試劑,都應(yīng)嚴(yán)格按照該轉(zhuǎn)染試劑的說明書進(jìn)行操作,其中包括轉(zhuǎn)染試劑的用量、基因用量、最佳轉(zhuǎn)染比例、孵育時(shí)間、檢測(cè)時(shí)間等重要因素。

六:轉(zhuǎn)染試劑有時(shí)呈云霧狀渾濁

如發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染試劑出現(xiàn)云霧狀渾濁應(yīng)立即聯(lián)系客服人員?;蜣D(zhuǎn)染試劑一般都呈清澈透明狀態(tài),呈云霧狀渾濁可能是由于轉(zhuǎn)染試劑發(fā)生了污染或儲(chǔ)存溫度太低,請(qǐng)務(wù)必按照試劑說明書要求的溫度進(jìn)行儲(chǔ)存。如出現(xiàn)此現(xiàn)象,建議溫浴10分鐘后,觀察是否澄清。


七:轉(zhuǎn)染復(fù)合物出現(xiàn)沉淀

當(dāng)轉(zhuǎn)染試劑和基因的用量都高于說明書用量,或復(fù)合物的孵育體系體積小于說明書建議時(shí),由于體系中過量的電荷發(fā)生了聚集會(huì)導(dǎo)致體系中的復(fù)合物出現(xiàn)沉淀。建議要嚴(yán)格參考說明書的用量進(jìn)行轉(zhuǎn)染。


八:siRNA轉(zhuǎn)染時(shí),基因沉默效率不夠高

影響siRNA沉默效率的因素很多,如基因本身是否被環(huán)境中的RNA酶污染降解?或所使用的細(xì)胞是否為難轉(zhuǎn)染細(xì)胞?以及是否按照說明書建議的用量進(jìn)行了操作等。首先應(yīng)該選擇合適的siRNA基因轉(zhuǎn)染試劑,確保細(xì)胞密度在60-70%之間,并嚴(yán)格按照說明書建議的用量去使用操作。


九:DNA-siRNA共轉(zhuǎn)染時(shí),基因沉默效率不夠高

當(dāng)細(xì)胞同時(shí)轉(zhuǎn)染DNA和siRNA時(shí),建議使用分別轉(zhuǎn)染的方式進(jìn)行。即使用基因轉(zhuǎn)染試劑分別與DNA和siRNA進(jìn)行復(fù)合,再將兩個(gè)復(fù)合物體系分兩次分別加入到同一個(gè)裝有細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)孔中。因DNA和RNA的轉(zhuǎn)染機(jī)理不相同,如只想使用一種轉(zhuǎn)染試劑同時(shí)轉(zhuǎn)染兩種基因,建議一定要使用通用型基因轉(zhuǎn)染試劑,如EZ poly™ 系列的DNA/RNA產(chǎn)品,即可以轉(zhuǎn)染DNA又可以轉(zhuǎn)染RNA。

EZ poly™in vivo siRNA & DNA 活體轉(zhuǎn)染試劑(NBS0207)

EZ poly™in vivo siRNA & DNA 活體轉(zhuǎn)染試劑

 

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

包裝規(guī)格

NBS0207-0.5ml

EZ poly™in vivo siRNA & DNA 活體轉(zhuǎn)染試劑

0.5ml

NBS0207-1ml

EZ poly™in vivo siRNA & DNA 活體轉(zhuǎn)染試劑

1ml

NBS0207-5ml

EZ poly™in vivo siRNA & DNA 活體轉(zhuǎn)染試劑

5x1ml

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

EZ poly™in vivo siRNA & DNA 活體轉(zhuǎn)染試劑是一款專用于體內(nèi)的基因轉(zhuǎn)染試劑,可通過尾靜脈注射的方式將基因傳送至腫瘤部位。與其它體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑相比,具有操作簡(jiǎn)便、體內(nèi)毒性低、穩(wěn)定性好、體內(nèi)循環(huán)時(shí)間長(zhǎng)、靶向性好等優(yōu)點(diǎn)。

 

應(yīng)用范圍:

EZ poly™in vivo siRNA & DNA 活體轉(zhuǎn)染試劑可適用于眾多動(dòng)物腫瘤模型。可攜帶熒光標(biāo)記基因、治療基因等到達(dá)腫瘤部位,并在腫瘤部位蓄積和表達(dá)。特別適用于各種常規(guī)腫瘤模型如HeLaB16F10、MCF-7、 MDA-MB-231A549等,均可得到較高的轉(zhuǎn)染效率,且重復(fù)性好。

 

保存條件

2-8℃保存一年

 

運(yùn)輸

常溫運(yùn)輸

 

體內(nèi)轉(zhuǎn)染方法:

以體重為20g的荷瘤鼠為例,請(qǐng)參考1的轉(zhuǎn)染規(guī)模調(diào)整,步驟如下:

 

1

試劑準(zhǔn)備: 按照1用量首先取20μL EZ polyin vivo siRNA & DNA 活體轉(zhuǎn)染試劑放置于樣品管中

2

復(fù)合物制備: 取20μL的質(zhì)粒DNA(DNA濃度為1μg/μL) 或siRNA(1.5nmol)與上述轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行復(fù)合

3

補(bǔ)加葡萄糖注射液: 取140μL的葡萄糖注射液加入到上述復(fù)合物溶液中

4

通過尾靜脈注射的方式,注射于鼠體內(nèi),24~48小時(shí)后檢測(cè)基因在腫瘤部位的的蓄積或表達(dá)

*DNA濃度可自行調(diào)整,總量等于20μg即可

體內(nèi)轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化:

可通過改變腫瘤體積的大小、基因的用量和濃度以及EZ poly™in vivo siRNA & DNA 活體轉(zhuǎn)染試劑濃度對(duì)體內(nèi)轉(zhuǎn)染進(jìn)行優(yōu)化。保證腫瘤體積在50mm3~200mm3最佳,EZ poly™in vivo siRNA & DNA 活體轉(zhuǎn)染試劑(μL): DNA (μg)可以在2:10.5:1之間調(diào)整;EZ poly™in vivo siRNA & DNA 活體轉(zhuǎn)染試劑(μL): siRNA(nmol)可以在10:1 20:1 之間調(diào)整。瘤內(nèi)基因蓄積建議在注射后24小時(shí)檢測(cè),瘤內(nèi)基因表達(dá)建議在注射后48小時(shí)檢測(cè)。

  

         表1.  不同體重鼠的體內(nèi)用量推薦

鼠體重

建議瘤體積

補(bǔ)加葡萄糖

注射液后終體積

DNA推薦用量

siRNA推薦用量

試劑用量

DNA

試劑用量

siRNA

15g

100mm3

150 μL

15μL

15μg

15μL

1.2 nmol

20g

100mm3

200 μL

20μL

20μg

20μL

1.5 nmol

25g

100mm3

250 μL

25μL

25μg

25μL

2.0 nmol

30g

100mm3

300 μL

30μL

30μg

30μL

2.4 nmol

 

EZ poly™in vivo siRNA & DNA 活體轉(zhuǎn)染試劑(NBS0207)

一:轉(zhuǎn)染效率低

影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素有很多。首先,與所轉(zhuǎn)染細(xì)胞有關(guān),有的細(xì)胞容易轉(zhuǎn)染,如HeLa、B16F10、293T等。有的細(xì)胞不易轉(zhuǎn)染,如4T1、NIH3T3、BMDC等。其次,與轉(zhuǎn)染試劑的用量及與DNA的比例有關(guān),在最佳的轉(zhuǎn)染比例附近可以達(dá)到最佳的轉(zhuǎn)染效果。最后,沒有使用最適宜的細(xì)胞密度,應(yīng)根據(jù)各種轉(zhuǎn)染試劑的說明書中推薦的細(xì)胞密度進(jìn)行細(xì)胞接種,更有利于提高轉(zhuǎn)染效率。


二:轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定,不能重現(xiàn)

轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定一般與兩個(gè)因素緊密相關(guān),一個(gè)是轉(zhuǎn)染試劑的穩(wěn)定性,另一個(gè)是基因的穩(wěn)定性。轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)按照說明書建議的保存溫度及條件進(jìn)行保存。如使用脂質(zhì)體類的轉(zhuǎn)染試劑,則不建議反復(fù)凍融,會(huì)引起該轉(zhuǎn)染試劑結(jié)構(gòu)上的變化?;蛉缍虝r(shí)間內(nèi)連續(xù)使用,可放置于4℃保存。若超過10天不使用,建議置于-20℃或-80℃長(zhǎng)期儲(chǔ)存以降低核酸的降解速度。


三:細(xì)胞毒性大

導(dǎo)致轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞毒性大的因素有很多,例如DNA的用量過大、轉(zhuǎn)染試劑的用量過大、轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞狀態(tài)較差以及培養(yǎng)基中抗生素的加入等。建議嚴(yán)格按照所選擇轉(zhuǎn)染試劑的說明書進(jìn)行操作,以避免細(xì)胞毒性大的問題。

四:沒有生成高效率的DNA轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物

沒有生成高效復(fù)合物的因素有很多。首先,可能是沒有選對(duì)合適的轉(zhuǎn)染試劑。挑選轉(zhuǎn)染試劑時(shí)應(yīng)考慮基因的種類及分子量等因素。其次,有的轉(zhuǎn)染試劑對(duì)血清的影響很大,應(yīng)在無血清情況下進(jìn)行轉(zhuǎn)染。使用諾寧生物的EZ poly™  系列轉(zhuǎn)染試劑無需考慮血清對(duì)轉(zhuǎn)染體系的影響,可在含血清培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

五:使用錯(cuò)誤的轉(zhuǎn)染操作步驟

無論使用哪一款基因轉(zhuǎn)染試劑,都應(yīng)嚴(yán)格按照該轉(zhuǎn)染試劑的說明書進(jìn)行操作,其中包括轉(zhuǎn)染試劑的用量、基因用量、最佳轉(zhuǎn)染比例、孵育時(shí)間、檢測(cè)時(shí)間等重要因素。

六:轉(zhuǎn)染試劑有時(shí)呈云霧狀渾濁

如發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染試劑出現(xiàn)云霧狀渾濁應(yīng)立即聯(lián)系客服人員。基因轉(zhuǎn)染試劑一般都呈清澈透明狀態(tài),呈云霧狀渾濁可能是由于轉(zhuǎn)染試劑發(fā)生了污染或儲(chǔ)存溫度太低,請(qǐng)務(wù)必按照試劑說明書要求的溫度進(jìn)行儲(chǔ)存。如出現(xiàn)此現(xiàn)象,建議溫浴10分鐘后,觀察是否澄清。


七:轉(zhuǎn)染復(fù)合物出現(xiàn)沉淀

當(dāng)轉(zhuǎn)染試劑和基因的用量都高于說明書用量,或復(fù)合物的孵育體系體積小于說明書建議時(shí),由于體系中過量的電荷發(fā)生了聚集會(huì)導(dǎo)致體系中的復(fù)合物出現(xiàn)沉淀。建議要嚴(yán)格參考說明書的用量進(jìn)行轉(zhuǎn)染。


八:siRNA轉(zhuǎn)染時(shí),基因沉默效率不夠高

影響siRNA沉默效率的因素很多,如基因本身是否被環(huán)境中的RNA酶污染降解?或所使用的細(xì)胞是否為難轉(zhuǎn)染細(xì)胞?以及是否按照說明書建議的用量進(jìn)行了操作等。首先應(yīng)該選擇合適的siRNA基因轉(zhuǎn)染試劑,確保細(xì)胞密度在60-70%之間,并嚴(yán)格按照說明書建議的用量去使用操作。


九:DNA-siRNA共轉(zhuǎn)染時(shí),基因沉默效率不夠高

當(dāng)細(xì)胞同時(shí)轉(zhuǎn)染DNA和siRNA時(shí),建議使用分別轉(zhuǎn)染的方式進(jìn)行。即使用基因轉(zhuǎn)染試劑分別與DNA和siRNA進(jìn)行復(fù)合,再將兩個(gè)復(fù)合物體系分兩次分別加入到同一個(gè)裝有細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)孔中。因DNA和RNA的轉(zhuǎn)染機(jī)理不相同,如只想使用一種轉(zhuǎn)染試劑同時(shí)轉(zhuǎn)染兩種基因,建議一定要使用通用型基因轉(zhuǎn)染試劑,如EZ poly™ 系列的DNA/RNA產(chǎn)品,即可以轉(zhuǎn)染DNA又可以轉(zhuǎn)染RNA。

EZ poly™DT轉(zhuǎn)染試劑(NBS2022)

EZ polyDT轉(zhuǎn)染試劑

 

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

包裝規(guī)格

NBS2022-0.5ml

EZ polyDT轉(zhuǎn)染試劑

0.5ml

NBS2022-1ml

EZ polyDT轉(zhuǎn)染試劑

1ml

NBS2022-5ml

EZ polyDT轉(zhuǎn)染試劑

5x1ml

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

EZ polyDT轉(zhuǎn)染試劑是一款適用于難轉(zhuǎn)細(xì)胞的DNA專用轉(zhuǎn)染試劑,可用于質(zhì)粒DNA的高效傳送。它具有極強(qiáng)的DNA轉(zhuǎn)染能力,與其它轉(zhuǎn)染試劑相比,具有轉(zhuǎn)染效率高、不受血清影響、毒性低、穩(wěn)定性好、轉(zhuǎn)染簡(jiǎn)單易行、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。

 

應(yīng)用范圍:

EZ polyDT轉(zhuǎn)染試劑可適用于眾多難轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的 DNA轉(zhuǎn)染、瞬時(shí)轉(zhuǎn)染及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。適用于多種貼壁細(xì)胞系,特別適用于各種難轉(zhuǎn)細(xì)胞如BMDC、4T1、CT26、DC2.4等難轉(zhuǎn)染細(xì)胞,均可得到較高的轉(zhuǎn)染效率,且重復(fù)性好。

 

保存條件

2-8℃保存一年

 

運(yùn)輸

常溫運(yùn)輸

 

 

 

質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染:

24孔板為例,請(qǐng)參考1的轉(zhuǎn)染規(guī)模調(diào)整,步驟如下:

1

細(xì)胞接種: 每孔接種0.5~1.0×105個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞培養(yǎng)12~24小時(shí),使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度達(dá)到60~70%融合度

2

DNA稀釋:將質(zhì)粒DNA稀釋于Opti-MEM培養(yǎng)基中,終濃度0.1mg/ml

3

復(fù)合物制備: 1μLEZ polyDT轉(zhuǎn)染試劑加入到9μL Opti-MEM培養(yǎng)基中,取4μL濃度為0.1mg/ml的質(zhì)粒DNA加入6μL Opti-MEM培養(yǎng)基中,兩者等體積混合

4

室溫靜置10分鐘

5

每孔20 μL復(fù)合物加入細(xì)胞培養(yǎng)板中,混勻,37℃培養(yǎng)18~48小時(shí)后檢測(cè)基因表達(dá),無需更換培養(yǎng)基

 質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染優(yōu)化:

可通過改變細(xì)胞密度、DNA濃度以及EZ polyDT轉(zhuǎn)染試劑濃度對(duì)轉(zhuǎn)染進(jìn)行優(yōu)化。保證細(xì)胞融合度在60%以上,EZ polyDT轉(zhuǎn)染試劑(μL):DNA (μg)可以在2:15:1之間調(diào)整。

1. 不同培養(yǎng)板所需轉(zhuǎn)染試劑和DNA的用量

 

培養(yǎng)板

單孔面積

接種

培養(yǎng)基

Opti-MEM

稀釋后終體積

DNA轉(zhuǎn)染

試劑用量

DNA

96孔板

0.3cm2

200μL

10μL

0.5μL

0.2μg

24孔板

2.0cm2

500μL

20μL

1.0μL

0.4μg

12孔板

4.0cm2

1mL

40μL

2.5μL

1.0μg

6孔板

10.0cm2

2mL

100μL

5.0μL

2.0μg

60mm

20.0cm2

5mL

0.2mL

10μL

4.0μg

100mm

60.0cm2

15mL

0.6mL

30μL

12.0μg

EZ poly™DT轉(zhuǎn)染試劑(NBS2022)

一:轉(zhuǎn)染效率低

影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素有很多。首先,與所轉(zhuǎn)染細(xì)胞有關(guān),有的細(xì)胞容易轉(zhuǎn)染,如HeLa、B16F10、293T等。有的細(xì)胞不易轉(zhuǎn)染,如4T1、NIH3T3、BMDC等。其次,與轉(zhuǎn)染試劑的用量及與DNA的比例有關(guān),在最佳的轉(zhuǎn)染比例附近可以達(dá)到最佳的轉(zhuǎn)染效果。最后,沒有使用最適宜的細(xì)胞密度,應(yīng)根據(jù)各種轉(zhuǎn)染試劑的說明書中推薦的細(xì)胞密度進(jìn)行細(xì)胞接種,更有利于提高轉(zhuǎn)染效率。


二:轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定,不能重現(xiàn)

轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定一般與兩個(gè)因素緊密相關(guān),一個(gè)是轉(zhuǎn)染試劑的穩(wěn)定性,另一個(gè)是基因的穩(wěn)定性。轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)按照說明書建議的保存溫度及條件進(jìn)行保存。如使用脂質(zhì)體類的轉(zhuǎn)染試劑,則不建議反復(fù)凍融,會(huì)引起該轉(zhuǎn)染試劑結(jié)構(gòu)上的變化?;蛉缍虝r(shí)間內(nèi)連續(xù)使用,可放置于4℃保存。若超過10天不使用,建議置于-20℃或-80℃長(zhǎng)期儲(chǔ)存以降低核酸的降解速度。


三:細(xì)胞毒性大

導(dǎo)致轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞毒性大的因素有很多,例如DNA的用量過大、轉(zhuǎn)染試劑的用量過大、轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞狀態(tài)較差以及培養(yǎng)基中抗生素的加入等。建議嚴(yán)格按照所選擇轉(zhuǎn)染試劑的說明書進(jìn)行操作,以避免細(xì)胞毒性大的問題。

四:沒有生成高效率的DNA轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物

沒有生成高效復(fù)合物的因素有很多。首先,可能是沒有選對(duì)合適的轉(zhuǎn)染試劑。挑選轉(zhuǎn)染試劑時(shí)應(yīng)考慮基因的種類及分子量等因素。其次,有的轉(zhuǎn)染試劑對(duì)血清的影響很大,應(yīng)在無血清情況下進(jìn)行轉(zhuǎn)染。使用諾寧生物的EZ poly™  系列轉(zhuǎn)染試劑無需考慮血清對(duì)轉(zhuǎn)染體系的影響,可在含血清培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

五:使用錯(cuò)誤的轉(zhuǎn)染操作步驟

無論使用哪一款基因轉(zhuǎn)染試劑,都應(yīng)嚴(yán)格按照該轉(zhuǎn)染試劑的說明書進(jìn)行操作,其中包括轉(zhuǎn)染試劑的用量、基因用量、最佳轉(zhuǎn)染比例、孵育時(shí)間、檢測(cè)時(shí)間等重要因素。

六:轉(zhuǎn)染試劑有時(shí)呈云霧狀渾濁

如發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染試劑出現(xiàn)云霧狀渾濁應(yīng)立即聯(lián)系客服人員?;蜣D(zhuǎn)染試劑一般都呈清澈透明狀態(tài),呈云霧狀渾濁可能是由于轉(zhuǎn)染試劑發(fā)生了污染或儲(chǔ)存溫度太低,請(qǐng)務(wù)必按照試劑說明書要求的溫度進(jìn)行儲(chǔ)存。如出現(xiàn)此現(xiàn)象,建議溫浴10分鐘后,觀察是否澄清。


七:轉(zhuǎn)染復(fù)合物出現(xiàn)沉淀

當(dāng)轉(zhuǎn)染試劑和基因的用量都高于說明書用量,或復(fù)合物的孵育體系體積小于說明書建議時(shí),由于體系中過量的電荷發(fā)生了聚集會(huì)導(dǎo)致體系中的復(fù)合物出現(xiàn)沉淀。建議要嚴(yán)格參考說明書的用量進(jìn)行轉(zhuǎn)染。


八:siRNA轉(zhuǎn)染時(shí),基因沉默效率不夠高

影響siRNA沉默效率的因素很多,如基因本身是否被環(huán)境中的RNA酶污染降解?或所使用的細(xì)胞是否為難轉(zhuǎn)染細(xì)胞?以及是否按照說明書建議的用量進(jìn)行了操作等。首先應(yīng)該選擇合適的siRNA基因轉(zhuǎn)染試劑,確保細(xì)胞密度在60-70%之間,并嚴(yán)格按照說明書建議的用量去使用操作。


九:DNA-siRNA共轉(zhuǎn)染時(shí),基因沉默效率不夠高

當(dāng)細(xì)胞同時(shí)轉(zhuǎn)染DNA和siRNA時(shí),建議使用分別轉(zhuǎn)染的方式進(jìn)行。即使用基因轉(zhuǎn)染試劑分別與DNA和siRNA進(jìn)行復(fù)合,再將兩個(gè)復(fù)合物體系分兩次分別加入到同一個(gè)裝有細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)孔中。因DNA和RNA的轉(zhuǎn)染機(jī)理不相同,如只想使用一種轉(zhuǎn)染試劑同時(shí)轉(zhuǎn)染兩種基因,建議一定要使用通用型基因轉(zhuǎn)染試劑,如EZ poly™ 系列的DNA/RNA產(chǎn)品,即可以轉(zhuǎn)染DNA又可以轉(zhuǎn)染RNA。

EZ poly™DNA轉(zhuǎn)染試劑(NBS6326)

EZ polyDNA轉(zhuǎn)染試劑

 

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

包裝規(guī)格

NBS6326-0.5ml

EZ polyDNA轉(zhuǎn)染試劑

0.5ml

NBS6326-1ml

EZ polyDNA轉(zhuǎn)染試劑

1ml

NBS6326-5ml

EZ polyDNA轉(zhuǎn)染試劑

5x1ml

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

EZ polyDNA轉(zhuǎn)染試劑是一款性能優(yōu)良的DNA轉(zhuǎn)染試劑,可用于質(zhì)粒DNA的傳送。它具有較強(qiáng)的DNA轉(zhuǎn)染能力,與其它轉(zhuǎn)染試劑相比,具有不受血清影響、毒性低、穩(wěn)定性好、轉(zhuǎn)染簡(jiǎn)單易行、重復(fù)性 好等優(yōu)點(diǎn)。

 

應(yīng)用范圍:

EZ polyDNA轉(zhuǎn)染試劑可適用于眾多易轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的DNA轉(zhuǎn)染、瞬時(shí)轉(zhuǎn)染及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。適用于多種貼壁細(xì)胞系,特別適用于各種常規(guī)細(xì)胞如HeLa、293T、COS7、CHOB16F10等,均可得到較高的轉(zhuǎn)染效率,且重復(fù)性好。

 

保存條件

2-8℃保存一年

 

運(yùn)輸

常溫運(yùn)輸

 

 

 

質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染:

24孔板為例,請(qǐng)參考1的轉(zhuǎn)染規(guī)模調(diào)整,步驟如下:

 

1

細(xì)胞接種: 每孔接種0.5~1.0×105個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞培養(yǎng)12~24小時(shí),使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度達(dá)到60~70%融合度

2

質(zhì)粒稀釋: 將0.5 μg質(zhì)粒稀釋于Opti-MEM培養(yǎng)基中,終體積10 μL

3

轉(zhuǎn)染試劑稀釋: 取1μL的EZ poly™DNA轉(zhuǎn)染試劑加入到9μL的 Opti-MEM培養(yǎng)基中,稀釋后的終體積為10μL

4

復(fù)合物制備: 復(fù)合物制備:將上述質(zhì)粒DNA稀釋液和轉(zhuǎn)染試劑稀釋液混合,輕輕吹打均勻后,室溫靜置10分鐘

5

將上述20μL復(fù)合物加入到24孔板中,輕輕吹打混勻,繼續(xù)培養(yǎng)18~48小時(shí)后檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,無需更換培養(yǎng)基

 

質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染優(yōu)化:

可通過改變細(xì)胞密度、DNA濃度以及EZ polyDNA轉(zhuǎn)染試劑濃度對(duì)轉(zhuǎn)染進(jìn)行優(yōu)化。保證細(xì)胞融合度在60%以上,EZ polyDNA轉(zhuǎn)染試劑(μL):DNA (μg)可以在1:15:1之間調(diào)整

 

1. 不同培養(yǎng)板所需轉(zhuǎn)染試劑和DNA的用量

 

培養(yǎng)板

單孔面積

接種

培養(yǎng)基

Opti-MEM

稀釋后終體積

DNA轉(zhuǎn)染

試劑用量

DNA

96孔板

0.3cm2

200μL

10μL

0.4μL

0.2μg

24孔板

2.0cm2

500μL

20μL

1.0μL

0.5μg

12孔板

4.0cm2

1mL

40μL

2.0μL

1.0μg

6孔板

10.0cm2

2mL

100μL

4.0μL

2.0μg

60mm

20.0cm2

5mL

0.2mL

8.0μL

4.0μg

100mm

60.0cm2

15mL

0.6mL

24.0μL

12.0μg

EZ poly™DNA轉(zhuǎn)染試劑(NBS6326)

一:轉(zhuǎn)染效率低

影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素有很多。首先,與所轉(zhuǎn)染細(xì)胞有關(guān),有的細(xì)胞容易轉(zhuǎn)染,如HeLa、B16F10、293T等。有的細(xì)胞不易轉(zhuǎn)染,如4T1、NIH3T3、BMDC等。其次,與轉(zhuǎn)染試劑的用量及與DNA的比例有關(guān),在最佳的轉(zhuǎn)染比例附近可以達(dá)到最佳的轉(zhuǎn)染效果。最后,沒有使用最適宜的細(xì)胞密度,應(yīng)根據(jù)各種轉(zhuǎn)染試劑的說明書中推薦的細(xì)胞密度進(jìn)行細(xì)胞接種,更有利于提高轉(zhuǎn)染效率。


二:轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定,不能重現(xiàn)

轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定一般與兩個(gè)因素緊密相關(guān),一個(gè)是轉(zhuǎn)染試劑的穩(wěn)定性,另一個(gè)是基因的穩(wěn)定性。轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)按照說明書建議的保存溫度及條件進(jìn)行保存。如使用脂質(zhì)體類的轉(zhuǎn)染試劑,則不建議反復(fù)凍融,會(huì)引起該轉(zhuǎn)染試劑結(jié)構(gòu)上的變化?;蛉缍虝r(shí)間內(nèi)連續(xù)使用,可放置于4℃保存。若超過10天不使用,建議置于-20℃或-80℃長(zhǎng)期儲(chǔ)存以降低核酸的降解速度。


三:細(xì)胞毒性大

導(dǎo)致轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞毒性大的因素有很多,例如DNA的用量過大、轉(zhuǎn)染試劑的用量過大、轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞狀態(tài)較差以及培養(yǎng)基中抗生素的加入等。建議嚴(yán)格按照所選擇轉(zhuǎn)染試劑的說明書進(jìn)行操作,以避免細(xì)胞毒性大的問題。

四:沒有生成高效率的DNA轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物

沒有生成高效復(fù)合物的因素有很多。首先,可能是沒有選對(duì)合適的轉(zhuǎn)染試劑。挑選轉(zhuǎn)染試劑時(shí)應(yīng)考慮基因的種類及分子量等因素。其次,有的轉(zhuǎn)染試劑對(duì)血清的影響很大,應(yīng)在無血清情況下進(jìn)行轉(zhuǎn)染。使用諾寧生物的EZ poly™  系列轉(zhuǎn)染試劑無需考慮血清對(duì)轉(zhuǎn)染體系的影響,可在含血清培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

五:使用錯(cuò)誤的轉(zhuǎn)染操作步驟

無論使用哪一款基因轉(zhuǎn)染試劑,都應(yīng)嚴(yán)格按照該轉(zhuǎn)染試劑的說明書進(jìn)行操作,其中包括轉(zhuǎn)染試劑的用量、基因用量、最佳轉(zhuǎn)染比例、孵育時(shí)間、檢測(cè)時(shí)間等重要因素。

六:轉(zhuǎn)染試劑有時(shí)呈云霧狀渾濁

如發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染試劑出現(xiàn)云霧狀渾濁應(yīng)立即聯(lián)系客服人員。基因轉(zhuǎn)染試劑一般都呈清澈透明狀態(tài),呈云霧狀渾濁可能是由于轉(zhuǎn)染試劑發(fā)生了污染或儲(chǔ)存溫度太低,請(qǐng)務(wù)必按照試劑說明書要求的溫度進(jìn)行儲(chǔ)存。如出現(xiàn)此現(xiàn)象,建議溫浴10分鐘后,觀察是否澄清。


七:轉(zhuǎn)染復(fù)合物出現(xiàn)沉淀

當(dāng)轉(zhuǎn)染試劑和基因的用量都高于說明書用量,或復(fù)合物的孵育體系體積小于說明書建議時(shí),由于體系中過量的電荷發(fā)生了聚集會(huì)導(dǎo)致體系中的復(fù)合物出現(xiàn)沉淀。建議要嚴(yán)格參考說明書的用量進(jìn)行轉(zhuǎn)染。


八:siRNA轉(zhuǎn)染時(shí),基因沉默效率不夠高

影響siRNA沉默效率的因素很多,如基因本身是否被環(huán)境中的RNA酶污染降解?或所使用的細(xì)胞是否為難轉(zhuǎn)染細(xì)胞?以及是否按照說明書建議的用量進(jìn)行了操作等。首先應(yīng)該選擇合適的siRNA基因轉(zhuǎn)染試劑,確保細(xì)胞密度在60-70%之間,并嚴(yán)格按照說明書建議的用量去使用操作。


九:DNA-siRNA共轉(zhuǎn)染時(shí),基因沉默效率不夠高

當(dāng)細(xì)胞同時(shí)轉(zhuǎn)染DNA和siRNA時(shí),建議使用分別轉(zhuǎn)染的方式進(jìn)行。即使用基因轉(zhuǎn)染試劑分別與DNA和siRNA進(jìn)行復(fù)合,再將兩個(gè)復(fù)合物體系分兩次分別加入到同一個(gè)裝有細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)孔中。因DNA和RNA的轉(zhuǎn)染機(jī)理不相同,如只想使用一種轉(zhuǎn)染試劑同時(shí)轉(zhuǎn)染兩種基因,建議一定要使用通用型基因轉(zhuǎn)染試劑,如EZ poly™ 系列的DNA/RNA產(chǎn)品,即可以轉(zhuǎn)染DNA又可以轉(zhuǎn)染RNA。

多聚賴氨酸溶液(10×PLL,1mg/ml,無菌),常用生化試劑

多聚賴氨酸溶液(10×PLL,1mg/ml,無菌)品牌:JinPan | 貨號(hào):JP-8309-10ml

Poly-L-lysine Solution, 1mg/ml, Sterilized

【保存條件】 

-20℃保存,有效期 2 年。 

【概述】 

Poly-L-lysine 的中文名為多聚賴氨酸,簡(jiǎn)稱 PLL。本 Poly-L-lysine 為 Poly-L-lysine hydrobromide,分子式為 L-Lys-(L-Lys)n-LLys· xHBr,分子量為 150,000-300,000,CAS Number 25988-63-0。 

多聚賴氨酸溶液是廣泛應(yīng)用的組織切片與玻片黏合劑,該多聚陽(yáng)離子分子與組織切片上 的陰離子相互作用會(huì)產(chǎn)生較強(qiáng)的黏合力。培養(yǎng)瓶表面的性質(zhì)對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)至關(guān)重要,細(xì)胞表 面的糖蛋白(陰性)易于吸附在親水性的表面上,因而細(xì)胞培養(yǎng)表面如果有相當(dāng)含量的陽(yáng)性 電荷更能促進(jìn)細(xì)胞吸附,這正是運(yùn)用多聚賴氨酸優(yōu)化細(xì)胞培養(yǎng)表面的重要所在。 

多聚賴氨酸溶液適用于組織學(xué)、免疫組織化、冰凍切片、細(xì)胞涂片、原位雜交等使用的 玻片的防脫片處理,以防實(shí)驗(yàn)操作過程中組織掉片。也可用于細(xì)胞培養(yǎng),增加細(xì)胞貼壁能力。 

本產(chǎn)品經(jīng)過濾除菌處理,可用無菌水稀釋至 1×使用。 

【使用建議】 

用作粘片劑時(shí):通常宜把 Poly-D-lysine 配置成 0.1-1mg/ml 溶液(本產(chǎn)品推薦稀釋成 1×使用, 即 10ml 1mg/ml 多聚賴氨酸溶液加 90ml 無菌水稀釋),隨后根據(jù)需要把載玻片或蓋玻片在 多聚賴氨酸溶液中處理 1-10 分鐘。隨后室溫晾干即可使用。

用于促進(jìn)細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng)時(shí):根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要把多聚賴氨酸配制成適當(dāng)濃度溶液后即可使用。 不同的細(xì)胞,多聚賴氨酸鋪被(Coating)的時(shí)間和濃度有所不同,請(qǐng)自行參考相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行適 當(dāng)?shù)匿伇?。配制成溶液后?20℃保存。多聚賴氨酸用于細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),較為常用的鋪被(Coating) 濃度為 0.1mg/ml,鋪被至少 5 分鐘,有些實(shí)驗(yàn)需要鋪被 1-2 小時(shí),有些情況則需要鋪被過夜。 隨后吸除多聚賴氨酸溶液,干燥培養(yǎng)器皿,至肉眼觀察完全干燥。通風(fēng)櫥內(nèi)吹風(fēng)數(shù)分鐘即可 完成干燥,對(duì)于有些實(shí)驗(yàn)則需要干燥 2 小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間。干燥時(shí)間較長(zhǎng)通常會(huì)更加有利于后續(xù)的細(xì)胞粘附。隨后即可直接進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),也可以用水、PBS 或培養(yǎng)液等適當(dāng)溶液潤(rùn)洗后 再進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。 

【注意事項(xiàng)】 

1. 第一次使用本試劑時(shí)建議先取 1~2 個(gè)樣品做預(yù)實(shí)驗(yàn)。 

2. Poly-L-lysine 和 Poly-D-lysine 都可以用于促進(jìn)細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng)。Poly-L-lysine 可以被某 些細(xì)胞所消化并吸收,攝入過多的 Poly-L-lysine 會(huì)產(chǎn)生一定的細(xì)胞毒性。如果遇到 Poly-L-lysine 有細(xì)胞毒性的情況,可以考慮選購(gòu) Poly-D-lysine。 

3. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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