產(chǎn)品編號(hào)
JJP010045-1g
TCEP (DTT Substitute)
1g
100
JJP010045-5g
TCEP (DTT Substitute)
5g
362
JJP010045-25g
TCEP (DTT Substitute)
25g
1319
JJP010045-100g
TCEP (DTT Substitute)
100g
3961
??????TCEP即TCEP-HCl，全稱Tris(2-carboxyethyl)phosphine?hydrochloride，中文名為三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽。分子式為C9H15O6P·HCl，分子量為286.65，CAS號(hào)51805-45-9。本產(chǎn)品在大多數(shù)情況下可以作為DTT的替代物使用。
圖1. TCEP-HCl的化學(xué)結(jié)構(gòu)式。
??????本產(chǎn)品為白色粉末，純度≥98%，易溶于水，最高可達(dá)310mg/ml (1.08M)，在有機(jī)溶劑如乙醇、甲醇等中溶解度較小。TCEP直接溶解在水中時(shí)的pH約為2.5。
??????TCEP是一種高效、無異味、不含硫醇基的水溶性還原劑，可選擇性還原多肽或蛋白質(zhì)中的二硫鍵。TCEP具有更佳的穩(wěn)定性、更廣的兼容性、更強(qiáng)的還原性、更好的選擇性，而且由于不含巰基，因此在多數(shù)應(yīng)用中不必去除，從而廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)和分子生物學(xué)中，特別是在蛋白質(zhì)化學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)中，是公認(rèn)的DTT的良好替代物。
??????TCEP對(duì)還原二硫鍵選擇性極強(qiáng)，除半胱氨酸外，幾乎不會(huì)與其它氨基酸有反應(yīng)，并且能在更寬的pH值范圍包括酸性條件下使用，從而有效減少酰胺鍵的水解。TCEP的反應(yīng)活性溫和、易溶、毒性小，且更容易操作，在酸性、堿性溶液中的穩(wěn)定性都很好。
??????TCEP使用范圍廣泛，無論是普通的SDS-PAGE中蛋白的還原，還是一些特殊的實(shí)驗(yàn)如固相金屬離子親和層析(IMAC)、質(zhì)譜、Ni柱純化等其它需要還原二硫鍵的實(shí)驗(yàn)，也特別適用于組氨酸標(biāo)記蛋白純化、馬來酰亞胺偶聯(lián)半胱氨酸殘基反應(yīng)，它能夠預(yù)防半胱氨酸殘基形成二硫鍵，但不像DTT或β-巰基乙醇本身易與馬來酰亞胺反應(yīng)。
??????TCEP的特點(diǎn)有：無氣味——與DTT和β-巰基乙醇不同，TCEP是無異味的，有助于創(chuàng)造更加健康的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境；高效——5到50mM 的TCEP在數(shù)分鐘內(nèi)即可完全還原大多數(shù)多肽或蛋白的二硫鍵(與DTT等效)；特異性——選擇性的完全還原甚至最穩(wěn)定水溶液中的烷基化二硫鍵；快速——在室溫和pH5的條件下，不到五分鐘即可還原蛋白的二硫鍵；穩(wěn)定——耐空氣氧化，無揮發(fā)性，與蛋白的其它功能基團(tuán)不反應(yīng)；通用性——可在廣泛pH范圍、鹽、去垢劑、溫度條件下還原多肽和蛋白；兼容性——不含巰基，因此在多數(shù)應(yīng)用中不必去除還原試劑。
??????TCEP與DTT主要特點(diǎn)的比較表格如下：
主要特點(diǎn)
TCEP
DTT
氣味
無
輕微的硫磺氣味(臭味)
水溶解性
310g/L
50g/L
還原性
維持2-3周
維持3-7天
穩(wěn)定性
無揮發(fā)性，耐空氣氧化，基本不受金屬離子影響，與蛋白的其它功能基團(tuán)不反應(yīng)
揮發(fā)性弱，盡量減少暴露在空氣中的時(shí)間，在Ni2+存在下，快速氧化
pH工作范圍
1.5-8.5
6.5-9.0
工作濃度
5-50mM (大多數(shù)體系)
1-100mM
Ni2+柱純化His標(biāo)簽的蛋白
適用
不適用
馬來酰亞胺標(biāo)記蛋白反應(yīng)
標(biāo)記前不需要去除
標(biāo)記前需要去除
??????在SDS-PAGE電泳中，一般終濃度在25mM左右的TCEP即可足夠還原蛋白樣品。也可直接使用各類含TCEP的無氣味的蛋白上樣緩沖液(JJP202、JJP206、JJP207、JJP208、JJP209、JJP202)。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
JJP010045-1g
TCEP (DTT Substitute)
1g
JJP010045-5g
TCEP (DTT Substitute)
5g
JJP010045-25g
TCEP (DTT Substitute)
25g
JJP010045-100g
TCEP (DTT Substitute)
100g
—
說明書
1份
保存條件：
??????-20℃或4℃保存，至少2年有效。室溫保存，至少一年有效。
注意事項(xiàng)：
??????本產(chǎn)品用于蛋白變性時(shí)，建議95℃水浴或PCR儀加熱5分鐘，溫度過高(如100℃)或時(shí)間過長(如超過15分鐘)，有可能會(huì)導(dǎo)致蛋白降解或上樣緩沖液中指示劑的顏色異常。
??????本產(chǎn)品在磷酸鹽緩沖液中，尤其在中性或堿性磷酸鹽緩沖液中很不穩(wěn)定。因此若實(shí)驗(yàn)過程需將本產(chǎn)品配制在PBS緩沖液中使用，必須現(xiàn)配現(xiàn)用。
??????大多數(shù)蛋白無需變性劑即可高效還原，但加入鹽酸胍等變性劑有助于將內(nèi)部二硫鍵暴露而易于和TCEP發(fā)生反應(yīng)。
??????不建議使用尿素作為變性劑，避免形成氰酸酯并與巰基反應(yīng)。
??????盡量防止金屬接觸TCEP溶液，否則會(huì)一定程度降低TCEP活性。在還原過程中向樣品緩沖液中加入5至20mM EDTA有助于防止巰基被二價(jià)金屬離子氧化，如Zn2+、Cu2+和Mg2+等。
??????還原后樣品應(yīng)盡快使用，長時(shí)間放置后會(huì)重新生成二硫化物。
??????本產(chǎn)品在溶液中帶電荷，因此不適用于等電聚焦(IEF)實(shí)驗(yàn)。
??????TCEP對(duì)人體有害，操作時(shí)請(qǐng)小心，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。