產(chǎn)品編號
JJP010046-2ml
0.5M TCEP (pH6.8, Adjusted with NaOH)
2ml
57
JJP010046-10ml
0.5M TCEP (pH6.8, Adjusted with NaOH)
10ml
205
??????TCEP即TCEP-HCl，全稱Tris(2-carboxyethyl)phosphine?hydrochloride，中文名為三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽。分子式為C9H15O6P·HCl，分子量為286.65，CAS號51805-45-9。本產(chǎn)品為0.5M TCEP溶液，用NaOH調(diào)節(jié)pH值至6.8，常作為DTT的替代物用于蛋白上樣緩沖液和其它還原試劑的配制。
圖1. TCEP-HCl的化學結(jié)構(gòu)式。
??????TCEP是一種高效、無異味、不含硫醇基的水溶性還原劑，可選擇性還原多肽或蛋白質(zhì)中的二硫鍵。TCEP具有更佳的穩(wěn)定性、更廣的兼容性、更強的還原性、更好的選擇性，而且由于不含巰基，因此在多數(shù)應用中不必去除，從而廣泛應用于生物化學和分子生物學中，特別是在蛋白質(zhì)化學、蛋白質(zhì)組學中，是公認的DTT的良好替代物。
??????TCEP對還原二硫鍵選擇性極強，除半胱氨酸外，幾乎不會與其它氨基酸有反應，并且能在更寬的pH值范圍包括酸性條件下使用，從而有效減少酰胺鍵的水解。TCEP的反應活性溫和、易溶、毒性小，且更容易操作，在酸性、堿性溶液中的穩(wěn)定性都很好。
??????TCEP使用范圍廣泛，無論是普通的SDS-PAGE中蛋白的還原，還是一些特殊的實驗如固相金屬離子親和層析(IMAC)、質(zhì)譜、Ni柱純化等其它需要還原二硫鍵的實驗，也特別適用于組氨酸標記蛋白純化、馬來酰亞胺偶聯(lián)半胱氨酸殘基反應，它能夠預防半胱氨酸殘基形成二硫鍵，但不像DTT或β-巰基乙醇本身易與馬來酰亞胺反應。
??????TCEP的特點有：無氣味——與DTT和β-巰基乙醇不同，TCEP是無異味的，有助于創(chuàng)造更加健康的實驗室環(huán)境；高效——5到50mM 的TCEP在數(shù)分鐘內(nèi)即可完全還原大多數(shù)多肽或蛋白的二硫鍵(與DTT等效)；特異性——選擇性的完全還原甚至最穩(wěn)定水溶液中的烷基化二硫鍵；快速——在室溫和pH5的條件下，不到五分鐘即可還原蛋白的二硫鍵；穩(wěn)定——耐空氣氧化，無揮發(fā)性，與蛋白的其它功能基團不反應；通用性——可在廣泛pH范圍、鹽、去垢劑、溫度條件下還原多肽和蛋白；兼容性——不含巰基，因此在多數(shù)應用中不必去除還原試劑。
??????TCEP與DTT主要特點的比較表格如下：
主要特點
TCEP
DTT
氣味
無
輕微的硫磺氣味(臭味)
水溶解性
310g/L
50g/L
還原性
維持2-3周
維持3-7天
穩(wěn)定性
無揮發(fā)性，耐空氣氧化，基本不受金屬離子影響，與蛋白的其它功能基團不反應
揮發(fā)性弱，盡量減少暴露在空氣中的時間，在Ni2+存在下，快速氧化
pH工作范圍
1.5-8.5
6.5-9.0
工作濃度
5-50mM (大多數(shù)體系)
1-100mM
Ni2+柱純化His標簽的蛋白
適用
不適用
馬來酰亞胺標記蛋白反應
標記前不需要去除
標記前需要去除
??????在SDS-PAGE電泳中，一般終濃度在25mM左右的TCEP即可足夠還原蛋白樣品。也可直接使用各類含TCEP的無氣味的蛋白上樣緩沖液(JJP202、JJP206、JJP207、JJP208、JJP209、JJP202)。
包裝清單：
產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝
JJP010046-2ml
0.5M TCEP (pH6.8, Adjusted with NaOH)
1ml×2
JJP010046-10ml
0.5M TCEP (pH6.8, Adjusted with NaOH)
10ml
—
說明書
1份
保存條件：
??????-20℃或4℃保存，至少1年有效。
注意事項：
??????本產(chǎn)品用于蛋白變性時，建議95℃水浴或PCR儀加熱5分鐘，溫度過高(如100℃)或時間過長(如超過15分鐘)，有可能會導致蛋白降解或上樣緩沖液中指示劑的顏色異常。
??????本產(chǎn)品在磷酸鹽緩沖液中，尤其在中性或堿性磷酸鹽緩沖液中很不穩(wěn)定。因此若實驗過程需將本產(chǎn)品配制在PBS緩沖液中使用，必須現(xiàn)配現(xiàn)用。
??????大多數(shù)蛋白無需變性劑即可高效還原，但加入鹽酸胍等變性劑有助于將內(nèi)部二硫鍵暴露而易于和TCEP發(fā)生反應。
??????不建議使用尿素作為變性劑，避免形成氰酸酯并與巰基反應。
??????盡量防止金屬接觸TCEP溶液，否則會一定程度降低TCEP活性。在還原過程中向樣品緩沖液中加入5至20mM EDTA有助于防止巰基被二價金屬離子氧化，如Zn2+、Cu2+和Mg2+等。
??????還原后樣品應盡快使用，長時間放置后會重新生成二硫化物。
??????本產(chǎn)品在溶液中帶電荷，因此不適用于等電聚焦(IEF)實驗。
??????TCEP對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。