產(chǎn)品編號
PV977
Human vWF ELISA Kit
96次
3198
的Human vWF ELISA Kit (Human von Willebrand Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人血管性血友病因子酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測人血清、血漿中VWF的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為216.8pg/ml，與人ADAMTS13、CD42b
、Glycoprotein、Thrombospondin-1等均沒有交叉反應(yīng)。板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
血管性血友病因子(von?Willebrand?Factor,?vWF)是由血管內(nèi)皮細(xì)胞和巨核細(xì)胞產(chǎn)生的一種多聚體糖蛋白。pre-pro-vWF蛋白包含2831個氨基酸，其中包括22個氨基酸的信號肽、741個氨基酸的前導(dǎo)肽和2050個氨基酸的成熟vWF單體。pro-vWF在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中通過C端的CK?(cysteine-knot)區(qū)域形成二聚體，隨后pro-vWF二聚體被運(yùn)輸至高爾基體中，并通過氨基末端所形成的二硫鍵形成多聚體結(jié)構(gòu)，前導(dǎo)肽的切除過程也發(fā)生在高爾基體中。成熟的vWF主要存在于血管內(nèi)皮細(xì)胞、巨核細(xì)胞和血小板中。細(xì)胞分泌出的ulvWF?(unusually-large?vWF)多聚體會迅速與血小板結(jié)合，從而造成血栓形成，此類vWF的產(chǎn)生需要一種特殊的蛋白酶ADAMTS13的參與。在血漿中存在的vWF分子量大多在500kDa到幾千kDa不等。當(dāng)機(jī)體處于出血狀態(tài)時，vWF會發(fā)生特定的構(gòu)象改變，暴露出特殊的糖蛋白結(jié)合位點，從而促進(jìn)血小板的聚集，達(dá)到止血的效果。除此之外，vWF還能夠與凝血因子VIII結(jié)合，延長凝血因子半衰期。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich?ELISA)檢測樣品中人vWF的濃度，其原理見圖1。人vWF特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時，其中的人vWF會與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入辣根過氧化物酶標(biāo)記人vWF抗體后，辣根過氧化物酶標(biāo)記人vWF抗體與人vWF結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。人vWF濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中人vWF濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測，可以進(jìn)行96次檢測。
包裝清單：
產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝
PV977-1
人vWF抗體預(yù)包被板
8孔×12條
PV977-2
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(20X)
30ml
PV977-3
人vWF標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
PV977-4
辣根過氧化物酶標(biāo)記人vWF抗體
10ml
PV977-5
洗滌液(20X)
30ml
PV977-6
TMB溶液
10ml
PV977-7
終止液
5ml
PV977-8
封板膜(透明)
2張
PV977-9
封板膜(白色)
2張
–
說明書
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效；試劑盒其它組分4℃保存6個月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組份嚴(yán)禁凍存。
注意事項：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。