產品編號
JJP52
Human IFN-β ELISA Kit
96次
3398
的Human IFN-β ELISA Kit (Human IFN-β Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit),即人干擾素β酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒,是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測人血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液中的IFN-β的ELISA試劑盒。
本產品檢測靈敏度高,特異性強,重復性好。多次重復檢測結果表明,最小檢出量為7pg/ml,與人IFN-α/β R1、IFN-α/β R2/Fc Chimera、IFN-ε、IFN-δ2、IFN-γ及小鼠IFN-β沒有交叉反應。板內、板間變異系數均小于10%。
干擾素β (Interferon beta, IFN-β),又稱成纖維細胞干擾素,是一種分子量大約為22kDa的分泌型蛋白,屬于I型干擾素家族。成熟的人IFN-β與小鼠和大鼠IFN-β分別具有47%和46%的氨基酸同源性。IFN-β主要由成纖維細胞分泌產生,但在機體受到病原體刺激的情況下,樹突狀細胞、巨噬細胞和內皮細胞也能分泌產生IFN-β。IFN-β的產生受到TRAF3, IRF3和NF-κB的轉錄水平調控。IFN-β通過與IFN-α/β異質二聚體受體結合進行信號傳遞,此過程中還有JAK1和TYK2等下游分子參與, IFN-β能夠引起STAT蛋白家族的激活和磷酸化。IFN-β通過調節(jié)抗炎細胞因子IL-10的表達,促進調節(jié)性T細胞的產生和抑制炎性小體活化等方式調控機體免疫應答。
IFN-β對于機體免疫的調節(jié)作用使其在預防自身免疫性疾病中可能具有重要意義。實驗證明,IFN-β缺陷的小鼠對于實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)敏感性較強。此外,IFN-β在人多發(fā)性硬化(MS)和EAE疾病中都表現(xiàn)出了Th17細胞響應抑制的效果,也是MS常用的治療方式之一。IFN-β對于葡聚糖硫酸鈉鹽誘導的小鼠結腸炎也有很好的治療效果。研究人員推測,上述這些免疫抑制效果可能與IFN-β能夠誘導調節(jié)性T細胞產生有關。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中人IFN-β的濃度,其原理見圖1。人IFN-β特異的單克隆捕獲抗體已預包被于酶標板上,當加入標準品或樣品時,其中的人IFN-β會與捕獲抗體結合。當加入生物素化的抗人IFN-β抗體后,生物素化抗人IFN-β抗體與人IFN-β結合,形成夾心的免疫復合物。隨后加入辣根過氧化物酶標記Streptavidin (HRP-Streptavidin),由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結合,因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液,固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質,在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。人IFN-β濃度與A450值呈正比,通過繪制標準曲線,對照樣品吸光度值,即可計算出樣品中靶蛋白濃度。
圖1.雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒,包括標準品檢測,可以進行96次檢測。
包裝清單:
產品編號
產品名稱
包裝
JJP52-1
人IFN-β抗體預包被板
8孔×12條
JJP52-2
樣品分析緩沖液
5ml
JJP52-3
標準品稀釋液(5X)
10ml
JJP52-4
人IFN-β標準品
2-4瓶
JJP52-5
人IFN-β生物素化抗體
10ml
JJP52-6
辣根過氧化物酶標記Streptavidin
10ml
JJP52-7
洗滌液(20X)
30ml
JJP52-8
TMB溶液
10ml
JJP52-9
終止液
5ml
JJP52-10
封板膜(透明)
2張
JJP52-11
封板膜(白色)
2張
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說明書
1份
保存條件:
標準品4℃保存,1-2周內有效,-20℃保存6個月內有效,試劑盒其它組分4℃保存6個月內有效。除標準品外,試劑盒其它組分嚴禁凍存。
注意事項:
由于標準品一般是凍干粉,在制備后需要嚴格校準,所以標準品的瓶數及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結晶,如果發(fā)現(xiàn)有結晶,請室溫水浴加熱使結晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標準品的精確性,標準品配制使用后,如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬,否則容易失效。
加樣時,請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭,一方面避免交叉污染,另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經過獨立測試,所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分,即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時,請獨立使用各個試劑盒中的試劑,請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻對保證反應結果的精準性很重要,在加液后請輕輕晃動整個96孔板,以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進行,要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要,洗滌不充分會使精確度下降并導致結果誤差較大。
檢測標準品和樣品時建議設置重復孔,以確保檢測結果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產生。
本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。